双孢蘑菇和蘑菇菌株的its-rflp分析.pdf

· 王波p’刘勇L3赵小青L2王一1’3甘炳成1贾定洪1彭卫红‘黄忠乾1 (。四川省农业科学院土壤肥料研究所成都610066;2四川大学生命科学院成都610066) (’四川农业大学资源环境学院四川雅安625014) 摘要:对采自四川和西藏的双孢蘑菇(Agaricua bisporus)和蘑菇()9个野牛菌株,以及双孢蘑菇5个栽培菌株为材料,。结果表明,ITS-PCR条带约为750bp,5种限制性内切酶(Msp 胁Ⅳ,、HaeII、AulI、TaqI)的ITS-RFLP分析结果为,只有4种限制性内切酶(mnfI、HaeII、Aul I、TaqI) 产生多态性条带,但完全能将双孢蘑菇和蘑菇区分的限制性内切酶为Taq I:对5种限制性内切酶的ITS·RFLP 分析数据进行聚类结果为,,并将双孢蘑菇和蘑菇区分开;,供试的11个野生和栽培双孢蘑菇菌株分为3个亚类群. 关键词:野生,双孢蘑菇,蘑菇,ITS。RFLP 蘑菇是重要的物种资源,世界上已报道蘑菇属200余种,我载43个种,2个变种(李宇,1990)。双孢蘑菇是全球重要的栽培种质资源,世界双孢蘑菇种质资源分为双孢蘑菇原变种、四孢变种和中间类型等(李荣春和杨志雷,2002)。我国有双孢蘑菇分布,但获得莴种的较少, 王波等(2001)分离了从我国两藏采集的野生白色双孢蘑菇中分离出菌种并进行了出菇试验。对采自西藏的野生双孢蘑菇菌株进行了生物学特性,酯酶同工酶,RAPD分子标记和杂交等研究。证明为双孢蘑菇,并是一种新类型(王泽生等,2005)。近年来,分子标记技术广泛用于大型真菌的系统发育、遗传多样性和菌种鉴定的研究。利用 ITS和LSU rDNA序列分析结果建立了蘑菇属42个种的62个菌株遗传关系(Jozsef Geml et )。,并取得了较好效果。(),,( ;刘新锐等,2007)。我们在四川和西藏采集了野生棕色、浅棕色和白色的双孢蘑菇,获得了菌种和标本,对其形态特征进行观察初步确定为双孢蘑菇,为了进一步确定其真实性,开展了ITS--RFLP分析鉴定。 1材料和方法 。 :采用CTAB[法提取基凶组总DNA。 ITSPCR-RFLP分析:ITS序列采用通用引物ITS4和ITS5进行扩增。PCR扩增采用25山反应体系,ITS序列PCR扩增后的产物,分别用Aul I、Hinfl,HaelIl,Taql,Mspl限制性 &Li系数(1979)计算遗传相异系数公式为:Cij=2a/限制内切酶分别酶切,酶切温度为37℃,时间为4小时,酶切产物在2%琼脂糖凝胶上电泳检测,在成像仪进行照相,以TIFF文件格式保存。 :I