免疫组化显色系统.ppt

免疫组化显色系统 Visualization Systems of Immunohistochemistry (IHC) 免疫组化技术原理?用标记物或显色物标记抗体或抗原?通过免疫学中的抗原与已知抗体反应来检测组织或细胞内的抗原成分?免疫组化染色是一项综合性技术?组织材料的准备?免疫组化染色前处理?免疫组化染色(一抗, 显色系统) 免疫组化原理图标注解一抗 1 一抗 2 抗兔二抗抗鼠二抗组织抗原 1 抗原 2过氧化物酶碱性磷酸酶双染阻断剂显色剂(棕色)显色剂(红色)葡聚糖骨架分子回顾过去直接法二步间接法三步间接法酶免疫复合物法链亲和素-生物素法( ABC) 目前常用的显色系统?一步法: EPOS ( Enhanced Polymer One-Step Staining) ?二步法: EnVision Systems ?双染: General Doublestain ?三步法: LSAB (Labeled Sstreptavidin -biotin) ?催化放大系统: CSA (Catalyzed Signal Amplication System) ?动物研究试剂盒: ARK (Animal Research Kit) 一步法 EPOS ?原理: 在一抗上通过多聚骨架标记过氧化物酶. 即一抗上已标记过氧化物酶. 这种一抗与抗原结合后即可直接显色. 多聚骨架分子特异性一抗组织抗原过氧化物酶一步法 EPOS ?主要实验流程组织片脱蜡,水化阻断( S2001) TBS 冲洗( S1968) 一抗/ HRP (U …) TBS 冲洗( S1968) 显色剂 DAB 或 AEC (K3467 或 K0697) 水漂洗素木精复染( S3309) 一步法 EPOS 特点: ?一抗孵育后直接显色?即用型试剂?快速(一步)完成?敏感性较差?昂贵?使用对象:?要求快速出结果的免疫组化实验对象二步法 EnVision ?原理: 在葡聚糖大分子上标记二抗及酶, 将传统的二抗和三抗(酶)连接在一起,形成一个复合物 EnVision . 两步孵育完成免疫组化. 二步法 EnVision ?原理图一抗与抗原结合 EnVision 二抗复合物与一抗结合