高效液相色谱仪的使用.ppt

高效液相色谱仪的使用
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主要内容
一、概述
二、类型
三、分离原理
四、仪器组成（重点）
五、仪器分析过程与操作
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一、概述
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年提出。分离出胡萝卜素、叶绿素和叶黄素。因一战爆发并未重视。
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色谱柱
固定相
流动相
色谱法
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色谱的发展
20世纪70年代高效液相色谱出现
1906色谱法发明
20世纪50年代气相色谱出现并广泛使用
19世纪中叶人们开始注意一些简单的扩散现象 染料
目前HPLC已成为应用
极为广泛的化学分离
分析的重要手段
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色谱的类型
气相色谱：流动相是气相
液相色谱：流动相是液相
色谱
液相色谱
柱色谱
纸色谱
薄层色谱
高效液相色谱
HPLC
气相色谱
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HPLC比起经典LC的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。
高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。经典色谱是重力加料，流出速度极慢，流动相速度为30ml·h-1，需用20h才能分离出20种氨基酸；而HPLC配备了高压输液设备，流速最高可达 10ml·min-1，只需l h之内即可完成氨基酸的分离。
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高效：固定相具有分离效果好、效率高，如用C18柱，采用梯度洗脱，。
高灵敏度：高灵敏度检测器，可检测μM级甚至nM级别的待测物。
高自动化：操作自动化，可仪器控制流动相比例、流速、波长、出峰时间、进样及自动生成分析报告等。
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2. HPLC与GC
（l）气相色谱法(GC)分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用HPLC进行分离和分析。
（2)GC中流动相是惰性气体，它与组分没有亲和力，仅起运载作用。而HPLC中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用。
（3）GC一般都在较高温度下进行的，而HPLC可在室温条件下工作。
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HPLC应用
（1）生命化学：蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、酶、维生素等物质的分离和测定；
（2）化学与精细化工：植物色素、高聚物、染料、化工产品、合成化合物等的分离和分析；无机离子的测定等；
（3）农业、食品与医药学：添加剂（甜味剂、防腐剂、着色剂）、营养成分（蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸等）、药物体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物、农药残留等；
（4）环境分析与毒理学：多环芳烃及农药残留、DNA加合物分析。
优点是灵敏度高，分离效果好；缺点是仪器设备费用昂贵，需摸索分析方法，操作严格，这是它的主要缺点。
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