前列腺特异性抗原(PSA)的检测
目录
PSA简介
PSA的制备
抗血清的制备
PSA的检测方法
四、
一、
二、
三、
一、 PSA简介
前列腺特异性抗原(Prostate specific antigen,PSA)是由前列腺上皮细胞合成分泌至精液中,是精浆的主要成分之一。
19世纪60年代末,Hare发现,在前列腺液及精液中含有一种分子量大约34000的精液特异性蛋白质
前列腺液中以有活性的游离形式(f-PSA)存在,血清中的PSA主要以结合形式存在,通常以f-PSA与结合PSA的和,总PSA(t-PSA)代表血清总的PSA水平。
临床上常用血清PSA密度(PSA与前列腺体积的比值:PSAD)和PSA速率(血清PSA水平的年变化率:PSAV),帮助鉴别良性前列腺增生和前列腺癌
二、PSA的制备
(一)组织和细胞可溶性抗原的粗提
(二)可溶性抗原的提取和纯化
(三)纯化抗原的鉴定
二、PSA的制备
(一)组织和细胞可溶性抗原的粗提
—— 高速捣碎组织法
——冻融法
二、PSA的制备
(二)可溶性抗原的提取和纯化---聚乙二醇沉淀法
(三)纯化抗原的鉴定
分子量的鉴定方法--- SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
通常选用分子量为2000-6000的PEG,蛋白质分子量越大,
沉淀所需PEG浓度越低
(一)选择免疫动物---雄性成年小鼠
(二)免疫方法----皮下注射
(三)动物采血法----断尾采血法
(四)抗血清的纯化---亲和层析法
四、PSA的检测方法
(一)化学发光法
(二)放射免疫法
(三)电化学发光免疫分析法
(四)Array-ELISA 法
(五)Luminex液相芯片
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