电场导向螺旋神经元神经突生长体外实验研析.pdf

复旦大学博上学位论文电场导向螺旋神经元神经突生长的体外实验研究方法:分别采用Laminin或PDL包被玻片,用组织块法体外培养螺旋神经元。选择有“自由神经突"形成的玻片移植到活细胞观察系统中,使神经突主干末段与平行电极电场体系中的电力线垂直。在不施加电场、100mV/mm的稳态直流电场和占空比20%的100mV/mm脉冲直流电场条件下,分别记录两种培养方法生长锥在2小时内不同时间的位点,计算其与原点连线与预计生长方向(即电力线垂直线)之间的角度,分别计算平均值。结果:在Laminin铺片的培养体系中,100mV/mm的稳态直流电场和占空比 20%的脉冲直流电场均可引起神经突向负极方向偏转;而在PDL铺片的培养体系中,神经突向正极方向偏转。在无电场的培养体系中,神经突无明显偏转。结论:稳态和脉冲直流电场对体外培养螺旋神经元的神经突生长有导向作用;导向的方向受培养底物的影响。关键词t螺旋神经元:神经突导向:脉冲电场;稳态直流电场:层粘连蛋白; 多聚赖氨酸第三部分电荷平衡式双相脉冲电场对体外培养螺旋神经元神经突生长方向的影响目的:观察电荷平衡式双相脉冲电场对体外培养螺旋神经元神经突生长方向的影响。方法:采用Laminin包被玻片,用组织块法体外培养螺旋神经元。选择有“自由神经突"形成的玻片移植到结合环状电极电场的活细胞观察系统中,使神经突末端的主干与两电极中心连线平行,并使生长锥位于经过其中一个电极中心的连线垂直线上,朝向电极方向。电极间距2mm,刺激频率250 Hz,振幅±lmA, 相宽100m,,分别选取3个位点作为研究对象,使其与电极距离分别为两电极间距的1/2、1倍和2倍,即lmm,2mm和 4mm处。记录4小时内生长锥的位移轨迹。并以生长锥位于1倍极间距处不施加电场作为对照。结果:电场作用下,位于1/2、l倍和2倍极间距处的生长锥时均向远离电极侧偏转。无电场作用时,神经突无明显偏转倾向。结论:电荷平衡式双相脉冲电场中,体外培养螺旋神经元神经突有远离电极的倾向。在远离电极时,这种倾向逐渐变小。关键词:螺旋神经元;神经突导向;电荷平衡式双相脉冲电流;层粘连蛋白中国图书分类号:R76 2 复旦大学博士学位论文电场导向螺旋神经元神经突生长的体外实验研究 Part I Study on theconstruction of neurite guidance system ofspiralganOion neurons bY electricfieldsinvitro Objectives:To establish aneuriteguidance system ofspiralganglion neurons bY electricfields inivtro. Methods:The spiralganglion ofpostnatalday 4-6Sprague-Dawley ratswere neurons wereculturedby dissociatedculturemethod or explants coating materialsincludedLaminin,PDL,PDL plus Laminin,Collagen I ofNeurofilament,MAP2 andTan·1 wereused toidentify systems ofelectric fieldswereconstructedbyinducing Pt-Irwires,rings orelectrodearray,which were differentlyconnected withsteady DC power,Function/Arbitrary waveform generator orCochlear tracesofgrowth cones wererecordedby takingphotosjust beforeandafterthe electricstimulus in aC02 incubator orby time lapse module inlivecellimaging(LCI)system aftertransplanting culture. Results:It was much easierforthe neuritesofspiral ganglion neurons e ‘''’ncuritcswit