谷氨酸脱氢酶的检测方法.doc

谷氨酸脱氢酶的检测方法.docSHANGHAI DIAZYME
GLDH检测方法
(Glutamate Dehydroge nase)
SDZ500140
目的
本程序是为了建立谷氨酸脱氢酶(Glutamate Dehydrogenase的活性检测方法，适用 于GLDH成品的活性检测。
检测

aKetoglutarate + NH3 + NADH + H + ► L-Glutamate+ NAD ++H2O
NADH的消耗可以通过340nm的光吸收进行检测。
：
A M Tris-HCl 缓冲液，pH
B NH4CI 溶液
C a -酮戊二酸溶液(pH -)
D NADH 溶液
E 酶稀释液： M Tris-HCl缓冲液,pH
试剂的配制方法详见各试剂配制记录，配制人员需完整填写配制记录。
3操作规程：

若仪器中无已保存参数，按以下参数设定。若已有相关参数，调取后确认
检测方法：动力学扫描
测量时间：180s
积分时间：120s
测量温度：30 ± 1C
测量波长：340nm
延迟时间：60s
系数/因子：

若待测样品为固体，可以按10mg样品/1000ul超纯水比例溶解。溶解后于2-8度放 置 30min。

, 200ul试剂B,100ul试剂C, 100ul D于30度孵育 2mi n。
，温和混匀后开始测定。
，记录相应数值：起始读数、△ A/min test、活性值(U/ml )。
(U/ml)-，若超出范围，待测样品需经试剂 D稀释后再
次进行检测。
，即其他操作不变，用500ul E代替样品加入比色皿后 进行反应，测定△ A/min blank。
计算公式 活性(U/ml) =( △ A/min test- △ A/min blank) x (稀释倍数)