强心苷的提取与分离.doc

强心苷的提取与分离提取分离色谱鉴定纸色谱薄层色谱强心苷的分离提纯通常比较复杂与困难,因为它在植物中的含量一般都比较低( 1% 以下), 而且同一中药中所含的强心苷类成分不仅种类多、结构性质相近, 还易受植物体内酶、酸的影响生成相应的次生苷,从而增加了成分的复杂性,同时共存的糖类、鞣质、皂苷、色素等,往往能影响或改变强心苷的溶解性,这些都增加了提取分离工作的难度。提取时还需考虑强心苷在植物体中的存在形式。如需提取原生苷,要注意抑制酶的活性, 防止酶水解的发生。措施诸如原料采收后要低温( 50℃~ 60℃) 通风快速干燥、保存期间注意防潮、用乙醇提取以破坏酶的活性。同时还要注意在提取过程中避免酸或碱的影响。如需提取次生苷,则要利用酶的活性,如采用发酵法进行酶解等。(一)提取提取强心苷通常用 70% ~ 80% 的乙醇为溶剂,若原料为种子类药材或含脂类杂质较多时, 需先用石油醚或汽油脱脂处理后再提取; 若原料为叶或全草, 含叶绿素较多时, 可用析胶法, 将醇提液浓缩后静置, 使叶绿素等脂溶性杂质成胶状沉淀析出, 滤过除去, 也可用活性炭吸附法除去稀醇提取液中的叶绿素。提取液中共存的糖、水溶性色素、鞣质、皂苷、酸性及酚性等物质可用氧化铝、聚酰胺吸附法或铅盐沉淀法除去, 但需注意强心苷也有可能被吸附而损失。提取液经上述初步除杂后,可用氯仿和不同比例的氯仿- 甲醇(乙醇)溶液依次萃取, 将强心苷按极性大小不同分为若干部分, 但每一部分仍为极性相似强心苷的混合物, 需做进一步分离(二)分离混合强心苷的分离可用萃取法、逆流分溶法和色谱法, 并对其中含量较高的组分选用适当溶剂反复结晶以获得单体。多数情况下, 由于混合强心苷的组成复杂, 往往需要几种方法配合使用,尤其结合各种色谱法进一步分离。常用的色谱法有吸附色谱和分配色谱。分离亲脂性强心苷(如单糖苷、次生苷)和苷元时, 一般选用吸附色谱, 吸附剂用硅胶或中性氧化铝, 洗脱剂可用氯仿- 甲醇、酯酸乙酯- 甲醇、苯、丙酮等。分离弱亲脂性强心苷时, 宜用分配色谱, 常用支持剂为硅胶、硅藻土、纤维素,洗脱剂为不同比例的醋酸乙酯- 甲醇- 水或氯仿- 甲醇- 水。(三)色谱鉴定纸色谱强心苷的纸色谱常用的溶剂系统多由氯仿、醋酸乙酯、苯、甲苯等有机溶剂与水混合而成, 但因水在这些溶剂中的溶解度较小, 可通过加入适量乙醇的方法来增加溶剂系统的含水量,以利于弱亲脂性强心苷的分离。通常强心苷的亲脂性较强时,多将滤纸预先用甲酰胺或丙二醇浸渍数分钟作为固定相, 以苯或甲苯(用甲酰胺饱和)为移动相。当强心苷的亲脂性较弱时,仍可以前者为固定相, 只是将移动相改为极性较大的溶剂, 如用二甲苯和丁酮的混合液, 或氯仿、苯和乙醇的混合液, 或用氯仿- 四氢呋喃- 甲酰胺( 50∶ 50∶ )、丁酮- 二甲苯- 甲酰胺( 50∶ 50∶4) 等溶剂系统作移动相。亲水性较强的强心苷,宜用水浸透滤纸作固定相,用水饱和的丁酮或乙醇- 甲苯- 水( 4∶6∶1) 、氯仿- 甲醇- 水( 10∶4∶5或 10∶8∶5 )作移动相。薄层色谱在强心苷的薄层色谱中, 以分配色谱的分离效果较好。不但所得色斑颜色清晰、色泽集中, 而且薄层上能承载的样品量也较大, 因此样品量稍大时也不会出现拖尾现象。分配色谱主要用于分离极性较强的强心苷类化合物, 常用硅藻土、纤维素