实验流动注射化学发光测定眼药水中的盐酸环丙沙星.docx

[实验目的]
1 掌握流动注射技术的基本原理以及化学发光分析法的基本原理
2 熟悉流动注射-化学发光分析系统的工作原理及仪器使用方法
3. 掌握流动注射化学发光法测量盐酸眼药水中盐酸环丙沙星含量的方法。
[实验原理]
化学发光(chemiluminescence)是指某些化学反应中发出可见光的现象。其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物，中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁至激发态，然后从激发态回到基态，同时将能量以光辐射的形式释放出来，产生化学发光。
图1 化学发光发生的反应过程
直接化学发光 间接化学发光
流动注射技术（Flow Injection）：原始的手工操作和现代化的检测仪器共存，严重阻碍了先进检测仪器更好的发挥作用；同时分析过程中的试验处理往往占去整个分析时间的90%，这种状况自然不能满足现代分析化学的要求。流动注射法是为解决这一矛盾在70年代中期出现的溶液处理技术的新观念。其主要特点包括：①广泛的适应性：可与多种检测手段联用；②高效率：100-300样/h，复杂的分析过程也能达到40-60样/h; ③低消耗：10-100mL/测定；④高精度：% - 1 %RSD,复杂的在线处理，%-3%RSD；⑤设备简单、价廉。
流动注射分析装置包括：液体传输设备；注样器；反应器；流通式检测器和信号读出装置。液体传输设备主要指蠕动泵；注样器是十六通注样阀；化学发光检测的反应器和流通式检测器合并为流通式盘管。
盐酸环丙沙星属于第三代喹诺酮类药物，抗菌能力强，临床广泛用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴菌引起的感染，对 内酰胺抗生素、氨基糖苷类以及四环素等多重耐药菌具有较好的抗菌活性。测定盐酸环丙沙星的分析方法主要有高效液相色谱法、毛细管电泳法、分光光度法 、电位法嘲、极谱法等。研究表明：在酸性条件下，盐酸环丙沙星对Ce4+-Na2SO3化学发光体系具有强的增敏作用，据此建立了盐酸环丙沙星的流动注射分析法。本方法具有分析速度快，仪器设备简单，灵敏度高等优点。用于盐酸环丙沙星滴眼液含量的测定，加标回收结果令人满意。
[仪器试剂]
BPCL微弱发光测量仪（中国科学院生物物理研究所）；HL-2D恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）；八通阀（杭州）；联机计算机。
硫酸铈溶液： ´ 10-4 mol/L（ mol/l硫酸溶解）；亚硫酸钠溶液： ´ 10-2 mol/l；盐酸环丙沙星标准溶液： mg/L( mol/l盐酸溶解)；盐酸环丙沙星滴眼液（规格5ml：15mg（按环丙沙星计）湖北东盛制药有限公司）
所用试剂均为分析纯，所用水为二次蒸馏水。
[装置和流路]
图1 流动注射-化学发光系统示意图
Figure 1 Diagram of Flow-injection -chemluminescence system
P. 蠕动泵(peristaltic); V. 六通阀(six-way valve); F. 流通池(flow cell); W. 废液(waste); PMT. 光电倍增管(photomultiplier); (amplifier); (high vol