菌落总数测定.ppt

食品卫生微生物学检验菌落总数测定*** 菌落总数测定菌落的概念: ?菌落( colony )是指细菌在固体培养基上经培养后生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物集落,它是由数以万计的相同细菌集聚而成的。菌落总数的定义: ?样品经过处理,在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度和时间、 pH、需氧性质等),所得 1mL(g) 检样中所含菌落的总数。所得结果包括一群在方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧和兼性厌氧菌。卫生学意义: ?菌落总数主要作为判定样品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察样品中细菌的性质和繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学综合评价时提供科学依据。主要修订内容?培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂。?菌落计数公式进行了修改。?添加了关于蔓延菌落的描述。?添加了 Petrifilm TM细菌总数检验测试片法。?添加了拍打式均质器或等效的设备。第一法平板计数法培养基改变情况平板计数琼脂( PCA) 胰蛋白胨 酵母浸膏 葡萄糖 琼脂 蒸馏水 1000mL 营养琼脂( NA) 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 琼脂 蒸馏水 1000mL 样品处理添加了拍打式均质器或等效的设备关于均质器使用效果和对检测结果的影响, 关于均质器使用效果和对检测结果的影响, 有不同的报道: 有不同的报道: ??不同食品样品采用不同的均质方法,测试不同食品样品采用不同的均质方法,测试结果不同结果不同。。??不同的均质方式对金黄色葡萄球菌和大肠不同的均质方式对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的检测的影响也不同。杆菌的检测的影响也不同。菌落总数的检验程序图检样 10倍系列稀释选择 2~3 个适宜样品匀液,各取 1mL 分别加入无菌培养平皿内每皿内加入适量培养基(PCA) 菌落计数 36±1℃48±2h 报告样品的稀释?固体和半固体样品:称取 25g 样品至盛有 225 mL 磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000r/min ~ 10000 r/min 均质 1min ~ 2min ,或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1min ~ 2min ,制成 1:10 的样品匀液。?液体样品:以无菌吸管吸取 25mL 样品至盛有 225mL 磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠) 中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液。?用 1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1mL ,沿管壁缓慢注于盛有 9mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用 1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1:100 的样品匀液。?按上述操作制备 10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用 1次 1mL 无菌吸管或吸头。