花生酸aa含量试剂盒说明书.doc

花生酸（AA）含量试剂盒说明书

测定意义：
花生酸（Arachidic acid）又叫二十烷酸，是一种饱和高级脂肪酸。花生酸存在于某些油脂中，含量约1%或更低 ，%的花生酸。
测定原理：
花生酸的甲酯化产物沸点较低，可以利用气相色谱法测定其含量。
需自备的仪器和用品：
气相色谱仪、低速离心机、氮吹仪、针头式过滤器（有机系，）、毛细管柱（KB-Wax，50m**）、可调式移液器、样品瓶（2mL）。
试剂的组成和配制：
试剂一：正己烷
试剂二：无水硫酸钠
试剂三： mmol KOH-CH3OH溶液
试剂四：花生酸甲酯标准品20 mg
样品制备：
1、组织的处理：将适量组织60℃过夜烘干， g组织干样进行研磨或粉碎，将磨粉后的样本转移至15 mL离心管中。用5 mL正己烷分3次冲洗研钵，一并转移至15 mL离心管内。缠好封口膜，50℃超声30 min。8000 r/min离心10 min，取上清至15 mL 离心管中。在残渣中加入5mL正己烷，重复上述提取步骤2次，合并上清。在上清中加入适量无水硫酸钠，震荡后离心。将上清液转移至2 mL EP管（使用前称重，记录质量为m1）中，氮吹至溶剂挥发完全，记录EP管重为m2。 mL试剂三，震荡溶解，避光反应1h。 mL正己烷，振荡混匀1 min，静置分层，取上层正己烷转移至2 mL EP管中，萃取3次，合并正己烷相。 mL正己烷，震荡溶解，过针头式过滤器后待测。
2、细胞或细菌的处理：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）。8000 r/min离心10 min，取上清至15 mL 离心管中。在残渣中加入5mL正己烷，重复上述提取步骤2次，合并上清。将上清液转移至2 mL EP管（使用前称重，记录质量为m1）中，氮吹至溶剂挥发完全，记录EP管重为m2。 mL试剂三，震荡溶解，避光反应1h。 mL正己烷，振荡混匀1 min，静置分层，取上层正己烷转移至2 mL EP管中，萃取3次，合并正己烷相。 mL正己烷，震荡溶解，过针头式过滤器后待测。
标准品的配制：
在试剂四中加入1mL正己烷，配成20mg/mL 母液，将母液用正己烷分别稀释成10 mg/mL、5 mg/mL、 mg /mL