N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶NAG试剂盒使用说明书.docx

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N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书.
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N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书.
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG)试剂盒使用说明书
(酶法·液体双试剂 )
用 途
本试剂盒用以测定尿液中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG)的活力。
原
理
在第一反响顶用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响，
在第二反响中，NAG作
用于基质
P-硝基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成
N-乙酰氨基葡萄糖，此
N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成
H2O2。此H2O2在过氧
化物酶(POD)的作用下与高敏捷的发色剂双〔
3-双(4-氯酚)甲基-4-?二甲氨苯基〕胺(BCMA)反
应，生成绿色色素。经过测定此色素可求得
NAG的活力。
第一反响：
HK
葡萄糖+ATP─────────→
葡萄糖-6-磷酸+ADP
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第二反响：
NAG
PNP-NAG+H2O──────→N-乙酰氨基葡萄糖
+p-硝基苯酚
NAGOD
N-乙酰氨基葡萄糖
+O2+H2O───→N-乙酰氨基葡萄糖酸
+H2O2
H2O2+BCMA+H+
POD
────→绿色色素+2H2O
试
剂
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试剂
成
份
含
量
──────────────────────────────────
R-1A1(冻干)
NAGOD
≥3000U/L
POD
≥12500U/L
HK
≥8000U/L
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ATP·2Na
≥5mg/ml
R-1A2(冻干)
PNP-NAG
R-1B
2-吗啉乙烷磺酸(MES)
30mmol/L
──────────────────────────────────
R-2A(冻干)
BCMA
R-2B
MES
30mmol/L
──────────────────────────────────
标准酶
NAG
约为50U/L
标准酶溶解液 MES 30mmol/L
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标 本
尿液
试剂配制
R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。溶解后，低温避光保留(2-8℃)可稳固二周。
R-2：以一瓶 R-2B溶解一瓶 R-2A。溶解后，低温避光保留 (2-8℃)可稳固二周。
标准酶溶液：汲取 标准酶溶解液溶解一瓶标准酶。
测定方法
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N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书.
剖析方法：速率 A；主波长：750nm；副波长：600nm（可不用）；样品量：；R-1：
240ul，R-2：120ul；校准方式：线性；反响方向：上涨；测定温度： 37℃。
样品与R-1混匀后反响 5分钟，加入 R-2混淆后延缓 157秒，测定125秒。
样品
主波长750nm
R-1
240ul
R-2120ul
副波长600nm
测光
测光
0
5
7
10min
计
算
As/min
NAG(U/L)= ━━━━━━×标准酶标示值
Astd/min
As/min= 测定管的吸光度变化量
Astd/min= 标准管的吸光度变化量
计算实例
采纳日立7020型自动剖析仪测得测定管的A/min为，标准管的A/min（标准酶的含量为U/L）,则
NAG(U/L)= ━━━━━━━×
参照范围