第二十章 常用分子生物学技术的原理及其应用.ppt

生物化学与分子生物学
常用分子生物学技术的原理及应用
The Principle and Application mon Used Techniques in Molecular Biology
第二十章
第一节
分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization and Blotting Technique
核酸分子杂交(nucleic acid hybridization)
在DNA复性过程中,如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中,或把DNA与RNA放在一起,只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系,就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex) 。
一、分子杂交与印迹技术的原理
复性
RNA
DNA
(一)印迹技术
利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子转移到NC等各种膜上,使之成为固相化分子。这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹,因此称之为“blotting”,译为印迹技术。
用放射性核素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为“探针”,探针可以与固定在NC膜上的核苷酸结合,判断是否有同源的核酸分子存在。
(二)探针技术
二、印迹技术的类别及应用
(一)DNA印迹(Southern blotting)
(二)RNA印迹(Northern blotting)
(三)蛋白质的印迹(Western blotting)
用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。
用于RNA的定性定量分析。
用于蛋白质定性定量及相互作用研究。
其他:
斑点印迹(dot blotting)
原位杂交(in situ hybridization)
DNA点阵(DNA array)
DNA芯片技术(DNA chip)
三种印迹技术的比较