肉汤琼脂培养基使用说明.doc

编号: 022020 品种名称:营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)(Nutrient Agar) 用途: 用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养,也可用于消毒效果测定(GB/-2003 ,GB/-2003 ,GB15979-2002 和 GB15981-1995) 。原理: 蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。图鉴: 配方(每升): 蛋白胨 10g 牛肉膏粉 3g 氯化钠 5g 琼脂 15g 最终 ± 使用方法: 1、称取本品 33g ,加入蒸馏水或去离子水 1L,搅拌加热煮沸至完全溶解, 分装三角瓶, 121 ℃高压灭菌 15min ,备用。 2、(食品)以无菌操作称取检样 25克(或25mL) ,放入含有 225mL 灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠),充分振摇,即为1:10的均匀稀释液。依次做 1:100 ,1:1000 ……稀释液。 3、根据对样品污染情况的估计,选择 2—3个合适的稀释度,分别在做 10 倍稀释的同时,吸取 1mL 稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做 2个平皿。 4、稀释液移入平皿后应及时将凉至 46℃左右的培养基注入平皿约 15mL , 并转动平皿使混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有 1mL 稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后,倒置于 36±1℃温箱中培养 48±2h。 5、观察结果。 6、菌落计数方法: 做平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,在计下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 7、菌落计数的报告: 选取菌落数在 30-300 之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以 2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落;如有不同来源的几条链,则应将每条链视为一个菌落计 A:稀释度的选择: 应选择平均菌落数在 30-300 之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见附表)。 30-300 之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于 2,则应报告其平均数;若大于 2则报告其较小的数字(见表中例 2及3)。若所有稀释度的平均菌落数均大于 300 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例 4)。若所有稀释度的平均菌落数均小于 30,则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例 5)。若所有稀释度均无菌落生长,则以小于 1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6)。若有稀释度的平均菌菌落数均不在 30-300 之间,其中一部分大于 300 或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。菌落数的报告: 菌落数在 100 以内时,按其实有