肺炎支原体pcr试剂盒说明书.doc

肺炎支原体PCR试剂盒说明书
1、试剂盒简介货为了适应肺炎支原体PCR试剂盒快速检测和疫病研究的需要，本公司参照 OIE 国际标准中规定的引物序列，经多次实验及系统优化，开发生产了本试剂盒。应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、肺炎支原体PCR试剂盒说明书
1、试剂盒简介货为了适应肺炎支原体PCR试剂盒快速检测和疫病研究的需要，本公司参照 OIE 国际标准中规定的引物序列，经多次实验及系统优化，开发生产了本试剂盒。应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、安全操作简单、应用广泛和高通量检测等特点及优点。2、试剂盒组成:
试剂盒组成包括核酸提取试剂和核酸扩增试剂，具体组成参见表 1：s
表 1：试剂盒组成（50test/盒）
样本处理及要求：
：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆：用预冷的PBS (, pH=)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.  细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
试剂盒组成及试剂配制：
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 
2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶
4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8.
 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
操作流程:
，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
；空白孔不加。
，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温