兔膝OA腔内注射牛膝多糖对软骨细胞凋亡的影响.doc

兔膝OA腔内注射牛膝多糖对软骨细胞凋亡的影响.doc兔膝 OA腔内注射牛膝多糖对软骨细胞凋亡的影响【摘要】目的:探讨关节腔内注射牛膝多糖液对骨性关节炎软骨细胞凋亡率的影响。方法: 造模成功后, 实验兔左侧膝关节腔内注射牛膝多糖液 ,右侧膝关节内注入玻璃酸钠 ,每周 1 次,共 4 次。于0、 15、 30d 各处死 12 只实验兔,观察软骨细胞凋亡及凋亡率。结果: 治疗前各组细胞凋亡率比较无明显差异( P> ); 治疗第 15 天各组与治疗前比较差异均有统计学意义( ) ;治疗第 30 天各组与治疗前比较差异均具有统计学意义( P< ) ,两组间差异有统计学意义( P< )。结论:牛膝多糖能够更好的促进骨性关节炎修复,具有很好的临床价值。【关键词】牛膝多糖;膝骨关节炎;软骨细胞;凋亡率【中图分类号】 【文献标志码】 A 【文章编号】 1007-8517 ( 2015 ) 22-0014-02 骨关节炎是一种退行性骨关节病, 以关节软骨退变及软骨下骨变化为主要特征[1] 。骨关节炎发生以膝、髋部最为常见, 且在 60 岁以上中老年人群的膝骨关节炎发病率高达 49%[2] 。研究分析关节腔内注射牛膝多糖液对玻璃酸钠骨性关节炎软骨细胞凋亡率的影响, 探讨牛膝多糖对骨性关节炎的作用,为临床治疗提供实验依据。 1 材料与方法 实验材料 实验动物健康 6~8 月龄新西兰雄性大白兔 36只, 体重 g 左右, 由南昌大学医学院动物科学部提供。动物合格证号: 江西医动证字第 04106-01 号, SPF 级。 仪器与试剂 XYS-13 型荧光显微镜(上海上光新光学科技有限公司); CCK-8-1000T 型细胞周期与凋亡试剂盒( 上海歌凡生物科技有限公司)。 药品中药怀牛膝(江西中医药高等专科学校附属医院中药房提供并鉴定)。粉碎过目, 放入多功能提取罐, 先加入蒸馏水 400 L 提取 2 次,药物残渣再加蒸馏水 300L 提取 2 次;提取液合并浓缩,然后加入 3 倍量乙醇进行纯化, 得白色沉淀物, 沉淀经干燥得牛膝多糖粗提物, 进一步使用乙醇纯化,得牛膝多糖纯化物;将纯化物配成相当生药 4g 的水溶液放冰箱备用。 实验方法 动物分组动物进行左右侧造模膝骨性关节炎, 左膝为治疗组, 右膝为对照组。 造模采用改良 Hulth 模型造模, 取符合要求的 36 只雄性新西兰白兔,用 3% 戊巴比妥钠以 30mg/g 剂量对动物耳缘静脉注射麻醉,固定于手术台上, 双膝关节局部脱毛, 备皮, 消毒, 关节内侧进行长 4cm 左右纵切口, 切断内侧副韧带, 摘除内侧半月板, 切断前交叉韧带, 保留后交叉韧带, 保护软骨面, 彻底止血, 清理缝合及固定。术后 1 周内每天强迫动物进行 30min 超疲劳活动, 共观察 3 个月。然后进行 X 线观察显示有明显的关节腔狭窄及骨刺形成,以获得骨性关节炎模型[3] 。 给药造模成功后的第 1 天,实验左侧膝关节腔内注射治疗物牛膝多糖液 ,右侧膝关节内注入对照药物玻璃酸钠 ,每周 1 次,共 4 次。实验的第 0、 15、 30 天分别处死 12 只试验兔,取材后进行软骨细胞凋亡观察, 并观察