微生物实验报告.doc

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动物微生物及免疫学实验报告
实验目的
度、湿润度、透明度、颜色等。
取单个菌落进展革兰氏染色镜检
取干净的载玻片，用记号笔在其一面做好正反面标记，再在载玻片另一面中央滴上一小滴蒸馏水。
将接种环在火焰上灭菌，待冷却后，在酒精灯旁从标记的单个小菌落中取少许细菌置于蒸馏水中混匀〔同时盖好平板倒扣置于一旁〕，，再在酒精灯火焰上方以钟摆速度通过固定好细菌，待冷却进展染色。
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先滴加草酸结晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革兰氏碘液溶液染色1~2min，再水洗；随后滴加95%的酒精脱色30~60s，再水洗；最后滴加稀释的品红进展复染30~60s，再水洗；待枯燥或吸水纸吸干后镜检。
将枯燥的载玻片放在1000倍油镜下，滴加一滴松柏油进展镜检，观察其形态特征，判断细菌的种属。
细菌接种培养
消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进展火焰灭菌。
接种：右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将平皿揭开约20。左右，然后将接种环插入揭开的平板口内蘸去一下镜检标记的小菌落，再用划线接种的方法接种到一个血清平板、LB平板或麦康凯平板上。并用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、菌种、部位等标记，将平板倒放。
将接种好的平板倒扣放入37℃培养箱中，反向培养24小时。
注：油镜用完后应立即清理物镜上的松柏油；划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，翻开无菌操作台内的紫外灯。
菌液的制备
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镜检：用革兰氏染色法在1000倍油镜下镜检，观察并记录是否为纯培养的细菌。
分装液体培养基：先对无菌操作台及需要使用的器械进展消毒灭菌，然后用钳子揭开一个空试剂瓶，用倾倒的方法在酒精灯旁从液体培养基大试剂瓶中分装于空试剂瓶内，并立即盖上液体培养基大试剂瓶瓶塞。
接种：右手持接种环，用火焰对其进展灭菌，待冷却后，取出纯培养的平板，在无菌操作台内酒精灯旁，蘸去少许细菌，左手倾斜液体培养基，将接种环，伸入液体培养基内搅动，然后取出对接种火焰环灭菌，并用灭菌的包装纸捆绑好后，用记号笔做好相应标记，置于一旁。
培养摇菌：将接种好的液体培养基置于水浴培养箱中培养24小时。
注：分装一个培养基就接种一个培养基，不得全局部装完后再一个一个接种。
小鼠致病性实验
**：选择安康的青壮年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋转数周让其眩晕，然后用左手的拇指和食指捏住两耳及头部皮肤，并翻转左手，使其头部朝下，以到达内脏前移的目的。
接种：先用酒精棉球蘸取酒精对注射部位擦洗消毒，。
观察：将接种的小白鼠放在适宜的环境下生活，并在鼠笼处用记号笔标记好接种时间、菌种等。
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再培养鉴定：待小白鼠死亡后，对其进展解剖，观察其内脏病变情况，并取肝脏直接涂在相应培养基上，在适宜条件下反向培养24小时后，取菌落细菌进展镜检观察判断。
注：在注射小白鼠2小时候需要观察小白鼠是否因注射时伤害到内脏而死亡。
生化试验
取生化试验管将培养液用力甩在一边，在酒精灯旁再用钳子将生化试验管另一边剪断，并在酒精灯旁将纯培养的细菌用接种环接种在生化试验管培养液中，倒放固定在塑料板上，并在塑料板上用记号笔做好菌种等标记，置于37℃培养箱中培养24小时，观察生化管内的反响变化。
注：在剪断生化管时要小心，以防划破手指，且要注意不要将生化管上的标签剪掉了。
药敏实验
接种：先将无菌操作台台面及需要用的器械消毒灭菌，用钳子将菌液瓶翻开，然后在酒精灯旁用接种环蘸取菌液将其均匀地接种在相应的培养基上。
贴片：用灭菌的镊子将各种药敏纸片小心均匀地贴于接种好的培养基上，做好相应的记录，并用记