微生物实验显微镜直接计数法.ppt

微生物实验显微镜直接计数法
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二、实验原理

利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细微生物实验显微镜直接计数法
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二、实验原理

利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。
（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，→盖上盖玻片后，。
（2）计数室刻度的规格
16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
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计数室
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（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数。如图：
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
5个方格的总菌数
稀释倍数
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平板菌落计数法、干重法和比浊法等。
（1）平板菌落计数法
（2）干重法（适合浓度较高的样品）
取一定量菌液中→离心或过滤，分离菌体→烘干至恒重(温度可采用105℃、100℃或80℃) →称重。一般干重为湿重的10%-20%。
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（3）比浊法
在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值越大。
因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。
该法适合测定浓度较高的样品。
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三、实验材料
：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已稀释100倍)
：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤

检查计数板是否有破损。

在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。
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在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。
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静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数。

计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。
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五、注意事项
，计数室中不可有气泡产生；
-10个菌体为宜。
，格线上的菌体只数上方和右边线上的；
，芽体大小达到母细胞的一半时，作为两个菌体计算；
。在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为止。
。
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特别注意
血球计数板均有编号，一人一个，务必小心使用，若损坏，需原价赔偿或赔偿原物！
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显微直接计数结果
六、作业
100
100
5个中格总数
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