食品中菌落总数和大肠菌群的检测.ppt

2011年食品企业质量检验人员培训
太仓市产品质量监督检验所
质检所　詹克航

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菌落总数与大肠菌群的测定
二、大肠菌群的检测
一、菌落总数测定法
太仓市产品质量监督检验所
主讲人：平板计数琼脂；——菌落总数计算公式进行了修改；——增加了第二法“菌落总数PetrifilmTM测试片法”；)-2008
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　恒温培养箱：36℃±1℃  30℃±1℃。　冰箱：2℃～5℃。　恒温水浴箱：46℃±1℃。　天平：。　 均质器　 振荡器　无菌吸管：1mL（）、10mL（）或微量移液器及其吸头。　无菌锥形瓶：容量为250mL、500mL。　无菌培养皿：直径为90mm。　pH计或pH比色管或精密pH试纸。　放大镜或/和菌落计数器或PetrifilmTM自动判读仪。 　无菌刀、剪子、镊子等。
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4　培养基和试剂
　平板计数琼脂培养基 (Plate count agar PCA)，。 pH ＝± 　磷酸盐缓冲稀释液，。 pH ＝
无菌生理盐水, ：，121℃高压灭菌15min。
( 1 mol/L 氢氧化钠（NaOH）：称取40g氢氧化钠溶于1000mL水中。
1 mol/L 盐酸（HCl）：移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL
PetrifilmTM菌落总数测试片（aerobic count plate）和压板。)
75%乙醇。
区别：pH值（08： pH ＝±；03： pH ＝～ ）
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细 菌 学 检 验 程 序 -----细菌总数
5、 第一法 平板菌落计数法
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6、操作步骤
　固体和半固体食品：以无菌操作称取25g样品，放入于装有225 ％生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min～10000 r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液；或放入于225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1:10的样品匀液。　液体样品：以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液（表面取样的样品按一定的比例制成1:1样品匀液和/或1:10样品匀液。）。
　样品的稀释
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　用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1: mL，沿管壁缓慢注于装有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 　另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，如此每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。　根据对样品污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），分别在做10倍递增稀释的同时， mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时分别取1mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。　样品匀液移入平皿后，应及时将凉至46℃平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)注入平皿约15mL～20mL，并转动平皿使混合均匀。 mL空白稀释液的无菌平皿内作对照。
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　培养
琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养箱内培养48h±2h。水产品采用30℃±1℃培养72h±3h(08新增)。
琼脂凝固后，如果怀疑样品中含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），并在报告上记录该操作，待覆盖层凝固，翻转平板，
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　菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录相应的菌落数量和稀释倍数。菌落计数以菌落形成单位（colony forming units,CFU）表示。　平板菌落数的选择 选取菌落数在30CFU～300CFU个之间、无蔓延菌