微生物实验报告.doc

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动物微生物及免疫学实验报告
实验目的
掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。
掌握细菌分离培养的基本要领红进行复染30~60s，再水洗；待干燥或吸水纸吸干后镜检。
将干燥的载玻片放在1000倍油镜下，滴加一滴松柏油进行镜检，观察其形态特征，判断细菌的种属。
细菌接种培养
消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。
接种：右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将平皿揭开约20。左右，然后将接种环插入揭开的平板口内蘸去一下镜检标记的小菌落，再用划线接种的方法接种到一个血清平板、LB平板或麦康凯平板上。并用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、菌种、部位等标记，将平板倒放。
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将接种好的平板倒扣放入37℃培养箱中，反向培养24小时。
注：油镜用完后应立即清理物镜上的松柏油；划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。
菌液的制备
镜检：用革兰氏染色法在1000倍油镜下镜检，观察并记录是否为纯培养的细菌。
分装液体培养基：先对无菌操作台及需要使用的器械进行消毒灭菌，然后用钳子揭开一个空试剂瓶，用倾倒的方法在酒精灯旁从液体培养基大试剂瓶中分装于空试剂瓶内，并立即盖上液体培养基大试剂瓶瓶塞。
接种：右手持接种环，用火焰对其进行灭菌，待冷却后，取出纯培养的平板，在无菌操作台内酒精灯旁，蘸去少许细菌，左手倾斜液体培养基，将接种环，伸入液体培养基内搅动，然后取出对接种火焰环灭菌，并用灭菌的包装纸捆绑好后，用记号笔做好相应标记，置于一旁。
培养摇菌：将接种好的液体培养基置于水浴培养箱中培养24小时。
注：分装一个培养基就接种一个培养基，不得全部分装完后再一个一个接种。
小鼠致病性实验
**：选择健康的青壮年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋转数周让其眩晕，然后用左手的拇指和食指捏住两耳及头部皮肤，并翻转左手，使其头部朝下，以达到内脏前移的目的。
接种：先用酒精棉球蘸取酒精对注射部位擦洗消毒，。
观察：将接种的小白鼠放在适宜的环境下生活，并在鼠笼处用记号笔标记好接种时间、菌种等。
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再培养鉴定：待小白鼠死亡后，对其进行解剖，观察其内脏病变情况，并取肝脏直接涂在相应培养基上，在适宜条件下反向培养24小时后，取菌落细菌进行镜检观察判断。
注：在注射小白鼠2小时候需要观察小白鼠是否因注射时伤害到内脏而死亡。
生化试验
取生化试验管将培养液用力甩在一边，在酒精灯旁再用钳子将生化试验管另一边剪断，并在酒精灯旁将纯培养的细菌用接种环接种在生化试验管培养液中，倒放固定在塑料板上，并在塑料板上用记号笔做好菌种等标记，置于37℃培养箱中培养24小时，观察生化管内的反应变化。
注：在剪断生化管时要小心，以防划破手指，且要注意不要将生化管上的标签剪掉了。
药敏实验
接种：先将无