中药指纹图谱操作指南.doc

-
. z.
中药指纹图谱操作指南
说明：本实验研究规程指南为在原技术要求的根底上规中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制订。本指南未能概括的容，通过实践可自行补充调整，但申报要容填写于表三，并附试验完毕后的指纹图谱。 　表三〔推荐〕供试品批号 　
生产单位 　
供试品数量 　
供试品留样 数量："容器："贮藏地点及条件：" 　　指纹图谱研究用的原药材、半成品及注射剂成品均应有10批以上的样品供实验，以保证指纹图谱的可重复性。 二、供试品溶液的制备(一) 药材供试品溶液的制备
-
. z.
　取样：供试品取样应注意代表性，以保持实验室取样与实际生产应用药材一致，例如地上局部的药材，～1Kg，分别称量茎、叶、花、果的大致比例并做记录。例如果实类药材，生产时去除种子的，供试品也应除去种子，并做记录。如果药材表观质量不均匀〔如大小不一、肥瘦不等、粗细不匀等〕，应注意供试品的取样有代表性，其后的试验中，必要时应做比拟试验，以考察所含成分有无显著差异，供生产参考。　　
称样：应按照常规要求，将选取的供试品适当粉碎后混合均匀，再从中称取试验所需的数量，一般称取供试品与选取样品的比例为1：10，即如称取1g供试品，应在混合均匀的10g 选取的样品中称取。因为指纹图谱需要提供量化的信息，称取供试品的精度一般要求取3位有效数字。
制备：药材指纹图谱的主要目的，一是考察药材本身的质量情况，二是以药材的指纹图谱为参比，提取物及制剂的指纹图谱与之比拟，以考察制剂与原药材的相关性。药材供试品溶液的制备，可选用适宜的溶剂和提取方法，定量操作进展，尽量使药材中的成分较多地在色谱图中反映出来，并到达较好的别离。最终制备的供试品溶液还应能适应色谱试验的需要，如液相色谱的供试品溶液宜用色谱流动相或色谱洗脱强度较弱的溶剂；薄层色谱用的供试品溶液可采用液液萃取或固液萃取，选用适宜的溶剂制备供试品溶液。气相色谱的供试品可采用水蒸气蒸馏法、顶空进样法或固相微萃取法，供试品如需使用溶剂，应用低极性低沸点的溶剂。
-
. z.
定容：供试品溶液最终应用适宜的溶剂溶于标定容量的容器中，制成标示浓度的供试品溶液〔g/mL或mg/mL〕。
放置：一般要求供试品溶液尽量新鲜配制，如连续试验需要，供试品溶液应在避光、低温、密闭容器条件下短期放置，一般不超过两周，溶液不稳定的，一般不超过48小时。
-
. z.
标签：须注明编号或批号，应与取样的药材编号一致，或有明确的关联，以保证数据的可追溯。 　　主要操作过程及数据应详细记录。　　(二)半成品(提取物)供试品溶液的制备： 称取不同批次的半成品〔提取物〕，参照"供试品溶液"的制备方法中相应的容制备成一定量的溶液，备用。标签须注明编号或批号，应与取样的药材编号一致，或有明确的关联，以保证数据的可追溯。主要操作过程及数据应详细记录。 　　(三)成品(注射剂)供试品溶液制备： 液体注射剂一般可直接或稀释后作为供试品溶液，必要时也可用适宜的溶剂提取并制备成一定量的溶液。固体形式的注射剂〔冻干粉针〕须注意注射剂成品的附加剂有无对色谱试验干扰。如有干扰，须研究采取适宜的样品预处理方法以排除干扰〔如含有氯化钠则液相色谱不可使用蒸发光散射检测器；如糖分太多，可能影响薄层色谱的清晰度和别离度；冻干粉针的骨架剂用量较大时也可能影响色谱的质量等〕。此外，单方注射剂药材或复方注射剂中不同药材成分类别如果相差较大，色谱条件要求不同，需要进展样品的预处理时，应分别进展试验，便于制备2以上的指纹图谱。主要步骤及数据应详细记录。 　　三、参照物　　(一)参照物的选择：指纹图谱的参照物质一般选取容易获取的一个以上注射剂中的主要活性成分或指标成分，主要用于考察指纹图谱的稳定程度和重现性，并有助于色谱的识别。在与临床药效未能取得确切关联的情形下，参照物〔复方注射剂应首选君药的活性成分或指标成分〕起着识别和评价色谱指纹图谱特征的指引作用，它并不等同于含量测定的对照品。指纹图谱一般色谱比拟复杂，标物不易选择，也不易插入，指纹图谱不是含量测定，故标物的作用也不等同于含量测定的标物，因此应慎重考虑选用标物质的必要性和可能性。参照物应说明名称、来源和纯度。如无参照物也可选指纹图谱中的稳定的色谱峰做为参照峰，说明其色谱行为和有关数据，并应尽可能说明其化学构造及化学名称。如情况需要，又有可能也可考虑选择适当的标物插入色谱中。 　　(二)参照物溶液的制备：精细称取，用适宜的溶剂制成标示浓度的溶液，备用。