微生物鉴定之生化实验大全.doc

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〔一〕碳水化合物代实验
糖〔醇、苷〕类发酵实验
原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解*种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不一样，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，生反响生成红色化合物。假设培养基中的胍基含量过少，则可参加少量含胍基的化合物等。
V-P试剂：%或原粉。40%的NaOH溶液。
实验方法：接种实验菌于葡萄糖蛋白胨水培养基〔与甲基红实验一样〕中，每次两个重复，置适温培养2-6d，取培养液和40%NaOH等量想混，参加少许肌酸，10min如培养液出现红色，即为实验阳性反响，有时需要放置更长时间才出现红色反响。
应用：本实验常与甲基红实验一起用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。
〔二〕蛋白质和氨基酸的代实验
明胶液化实验
原理：*些可以产生一种胞外蛋白水解酶〔明胶酶〕，能使明胶分解为氨基酸，使明胶失去凝固能力而液化，因而使半固体的明胶培养基成为流动的液体。
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实验方法：取18-24h的斜面培养物穿刺接种，并有两支未接种的空白对照。
结果观察：与30℃培养20天后观察，明胶液化的为阳性。由于室温下明胶培养基呈液状，因此在观察结果时，应将其放置于4℃的冰箱中30min后拿出观察。假设明胶仍能全部凝固为阴性，有局部或全部不能凝固为阳性。
吲哚实验〔Ind〕
原理：*些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，当参加吲哚试剂〔对二甲氨基笨甲醛〕后形成红色的玫瑰吲哚。该试验也称靛基质试验。
培养基：蛋白胨水培养基。
实验方法：将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白胨水培养基中，35℃孵育24-48h，沿试管壁慢慢参加吲哚试剂，观察结果。
结果：于两夜面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌的鉴别。大肠埃希菌为阳性，沙门菌属则为阴性。
H2S实验
原理：*些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产酸硫化氢，硫化氢遇亚铁离子或铅离子则结合形成黑色沉淀物〔硫化铁或硫化铅沉淀〕。
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实验方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基中，于35℃孵育24-48h，观察有无黑色沉淀出现。
结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。
应用：主要用于鉴别肠杆菌科中属及种的鉴别，如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性，其他菌属大多为阴性。但沙门菌属中亦有局部硫化氢阴性菌株，如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等。
尿素分解试验
原理：*些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性。
培养基：尿素培养基。
实验方法：将待检菌接种于尿素培养基，于35℃孵育18-24h观察结果。
结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌的普通变形杆菌脲酶阳性，另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。
苯丙氨酸脱氢酶实验
原理：测定细菌是否产生苯丙氨酸脱氢酶。细菌产生的苯丙氨酸脱氢酶使苯丙氨酸脱氢后生成苯丙酮酸，参加氯化铁试剂后产生绿色反响。
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培养基：苯丙氨酸琼脂培养基。
实验方法：将待检菌大量接种于苯丙氨酸琼脂培养基中，于35℃孵育18-24h，滴加10%三氯化铁试剂3-4滴，自斜面上方流下。
结果：有绿色出现为阳性。应立即观察结果，延长反响时间会引起退色。
应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属均为阳性，肠杆菌科其他细菌均为阴性。
氨基酸脱羧试验
原理：*些细菌可产生氨基酸脱羧酶，能分解氨基酸使其脱羧生成胺和CO2。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。
培养基：氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。
试验方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸〔赖氨酸、鸟氨酸和精氨酸〕脱羧酶试验管一支氨基酸脱羧酶对照管〔无氨基酸〕，各覆盖液体石蜡油，35℃孵育1-4d每日观察结果。
结果：对照管应为黄色，假设为溴甲酚紫指示剂，则测定管呈紫色为阳性，假设测定管呈黄色为阴性。假设对照管呈现紫色则实验无意义，不能做出判断。
应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。
〔三〕碳源利用实验
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枸橼酸盐利用试验〔CIT