色谱分离法新课件.ppt

关于色谱分离法新
第一页，共100页幻灯片
吸附色谱
排阻色谱
（凝胶色谱）
分配色谱
离子交换色谱
吸附能力的差异
分子尺寸的大小不同
两相中分配系数的不同
亲和力的差异
Adsorption chromat去小烧杯，将溶剂倒入溶剂槽中，立即将点好样的滤纸的一端浸入溶剂槽内展层。
展开方式可分为上行法、下行法和环行法及双向展开法等。
第十七页，共100页幻灯片

B. 展开方法（上行法）
将点有试样的滤纸条的下端浸入溶剂（但不能浸没点样处）上端固定在层析缸的上部，保持垂直，将缸密闭，使溶剂沿下端上升而展层。待溶液上升到距离纸上端3 ~ 4 cm 时，将滤纸取出，用铅笔在溶剂前沿处画线作记号（见右图）
第十八页，共100页幻灯片

B. 展开方法（下行法）
溶剂自纸的上端向下降（借助于重力的作用），具有分离速度快及连续挥发色谱的优点。
玻皿
玻片
玻璃棒
原点
剪成锯齿状，便于溶剂滴下
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B. 展开方法（环行法）
取一张圆形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至圆心处，在纸的中央滴上试液，干后，将滤纸夹在两个大小相同培养皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。
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B. 展开方法（双向展开法）
有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向展开法。该法是用正方形或长方形滤纸，在纸的一角上点样，先用一种展开剂朝一个方向展开，展开完毕，待溶剂挥发后，再用另一种展开剂朝与原来垂直的方向进行第二次展层。
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a. 有色物：直接观察各个色斑
无色物：
物理法显色：用紫外灯照，观察有无吸收或发出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅笔画下斑点的位置及大小。
化学法显色：利用各种物质的特性反应，喷洒适当的显色剂。如若被分离的物质含有氨基酸，则可喷茚三酮，多数氨基酸呈紫色，个别氨基酸呈黄色。其它化合物所用显色剂可从手册里查阅。
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四、应用
例１．氨基酸的分离（固定相为水）
流动相
分离情况
正丁醇：2 mol/L HAc = 1 : 1
酪氨酸、二碘酪氨酸
用水饱和的苄醇
亮氨酸、异亮氨酸
叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水＝16 : 16 : :
亮氨酸、异亮氨酸
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四、应用
例2. 糖的分离(固定相为水)
流动相
分离情况
醋酸乙脂:吡啶:水= 2 : 1 : 1
木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖
丁醇:吡啶:水= 45 : 25 : 40
乳糖、半乳糖、葡萄糖
丁醇:乙醇:水: NH3 = 40 : 10 : 49 : 1
尿中葡萄糖
丁醇:乙醇:水= 10 : 1 : 2
蜜二糖、果糖、葡萄糖、
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四、应用
例３．脂肪酸的分离（固定相为水）
流动相
分离情况
95%乙醇：浓氨水＝100 : 1
同系的直链脂肪酸
正己醇： mol/L 氨水＝1 : 1
烷氧基酸
流动相1:乙醇：浓氨水 : H2O = 80 : 5 : 15
流动相2：乙二醇乙醚：桉树脑：88%甲酸 = 5 : 5 : 2
草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、羟基醋酸、顺丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、乌头酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸
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四、应用
例4. 醇、酚的分离（固定相为水）
流动相
分离情况
丁醇：5%NaHCO3＝ 1 : 1
甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇、异戊醇、辛醇
己烷饱和甲醇
乙醇、异丙醇、丙醇、异丁醇、正丁醇
丁醇：乙醇：水＝ 4 : :
乙二醇、丙三醇、甘露糖醇、山梨醇、肌醇
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四、应用
流动相
分离情况
正丁醇：浓氨水：水＝4 : 1 : 5
磺胺嘧啶、磺胺噻睉、Sulfamerzine、p,p’-sulfonyldianiline
正丁醇：醋酸：水＝ 4 : 1 : 5
对胺基苯甲酸、维生素C、N－甲基－菸酰胺、菸碱酰胺、菸酸、潘妥宁、泛酸、VB6、VB1
甲苯：石油醚：乙醇：水＝200 : 100 : 30 : 70
雌酮、雌二酮、雌三酮、马烯雌酮、脱氢皮质甾酮酸、孕甾酮、顺式睾丸甾酮
例5. 其它类的分离（固定相为水）
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四、应用
例6．无机应用（固定相为水）
流动相
分离情况
12 mol/LHCl:甲醇:丁醇:甲基异丁酮＝55 : 35 : 5 : 5
K+、Rb + 、Cs +
乙醇