菌种的退化与保藏课件.ppt

关于菌种的退化与保藏
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第一节 菌种退化及防治
第二节 菌种保藏
第三节 菌种保藏机构
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菌种是各个国家的重要自然资源，尤其是优良的工业生产菌种是有野生型菌种经过诱变育种、杂交进行菌种纯化
所谓菌种纯化就是对菌种进行自然分离。首先将菌种制成单细胞或单孢子悬浮液，经稀释后将其涂布与琼脂平板上培养，待平板上单菌落培养成熟后挑取单菌落移种斜面，再经摇瓶 试验后测定其生产能力，从中选出高水平的菌种。

培养基和培养条件可以从多方面影响菌种的性状，因此，为了防止菌种退化，要选择合适的培养基和培养条件。

在菌种保藏过程中也会发生菌种退化现象，尤其是不良的保藏条件更易引起菌种退化。因此，要采取科学和有效的菌种保藏方法以防止菌种优良性状的退化。
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四、菌种复壮
菌种退化是不可避免的，如果生产菌种已经退化，那么我们要及时对已退化的菌种进行复壮，使优良性状得以恢复。从菌种退化的演化过程看，开始时所谓纯的菌株其实已包含了很少的衰退的细胞，到菌种退化时，虽然群体中大部分是衰退细胞，但仍有少数尚未衰退的细胞存在。因此，可以通过自然分离的方法将那些尚未衰退的细胞从群体中分离出来，使菌种的优良性状得以恢复。这就是所谓的菌种复壮。这种在菌种已退化的情况下通过自然分离的方法将少数尚未衰退的个体从退化的群体中分离出来以回复菌种原有优良性状的复壮，是一种消极的措施。积极的措施应该是在菌种的生产能力尚未退化前，经常进行自然分离，以保持菌种的生产性能稳定，同时也有可能使菌种的生产性能得到进一步的改进或提高。
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第二节 菌种保藏
菌种是一个企业乃至一个国家的重要生物资源，尤其是优良的工业生产菌种更是一个国家的重要财富，而科学的、有效的菌种保藏方法是防止菌种退化的必要措施，因此，研究和选择良好的菌种保藏方法具有重要意义。
菌种保藏要求不受杂菌污染，是退化和死亡降低到最低限度。从而保持纯种和优良性能。菌种保藏的基本原理是抑制杂菌的代谢活动，使菌种处于休眠状态、停止繁殖，以减少菌种的变异。为此，一个良好的保藏方法就要为菌种创造一个适合其长期休眠的环境条件，如干燥、低温、缺氧。缺乏营养、添加保护剂等。常用的菌种保藏方法有斜面保藏法。液体石蜡保藏法、砂土保藏法、麸皮保藏法、冷冻干燥保藏法、低温保藏法、液氮超低温保藏法等。
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一、斜面保藏法
斜面保藏法是将菌种接种于斜面培养基上培养，培养成熟后置于4℃冰箱保藏。斜面保藏法是一种短期的菌种保藏方法，广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和丝状真菌。
影响斜面保藏法的因素很多，归纳起来，主要有保藏培养基和保藏条件两个方面。保藏培养基一般要求营养成分相对贫乏些，氮资源略高而碳资源较低，以减少PH值下降。放线菌和霉菌以适当控制菌体生长而有利于孢子的形成为原则；采用贫乏和丰富培养基交替培养进行菌种保藏，有利于延缓菌种衰退。保藏条件要求温度控制在4℃左右；每1～3月移接一次；传代次数不超过3～4次。
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斜面保藏的缺点是斜面在保藏期间菌种的生长繁殖没有完全停止，存在自发突变的可能；在斜面转接过程中，易发生退化、污染；斜面在保藏期间，培养基中的水分易蒸发，导致渗透压增大，引起菌种衰退、死亡。
用斜面保藏发保藏菌种时，在斜面培养结束后，用无菌的橡皮塞代替棉塞，可以避免水分散发并且能隔氧，能适当延长菌种的保藏期。
二、液体石蜡保藏法
液体石蜡保藏法是直接将液体石蜡加入到生长好的菌种斜面上，然后将其放入4℃冰箱保藏，如图11-1所示。液体石蜡保藏法其实也是一种斜面保藏法，其优点是在斜面上加入了石蜡油，在保藏期间可以防止水分蒸发，并隔绝氧气，所以，能延长保藏的时间。液体石蜡保藏法的缺点是必须直立放在冰箱内，占据较大的空间。
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液体石蜡保藏法的应用较广，特别适用于固体培养基上不能形成孢子的丝状担子菌，但不适合以石蜡为碳源或对石蜡敏感的菌种
三、干燥保藏法
不少微生物能产生孢子或芽孢，孢子或芽孢处于休眠状态。在干燥环境中抵抗力强不会死亡。依据这一原理，可以把孢子或芽孢接种到适宜的载体上，人为地创造一个干燥的环境来保藏菌种。可以作为菌种干燥保藏的载体有砂土、滤纸、硅胶、麸皮等。干燥保藏法是将接有孢子或芽孢的载体经真空干燥置于低温下保藏。

此法使微生物吸附在砂土上进行保藏，砂土保藏法包括制备砂土和埋砂土两个步骤
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1）砂土制备
取黄沙，加入10%盐酸浸泡24h