蛋白质色谱分离方法(共6页).docx

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蛋白质色谱分离方法
摘要 蛋白质是分子多肽的分析和纯化，具有十分高的分辨力③。此外，离子色谱作为液相色谱的一种，以特制的离子交换树脂为固定相，不同pH值的水溶液为流动相。蛋白质色谱分离介质的选择则要根据蛋白质的等电点、疏水性、分子量等性质选择。
目前,用于蛋白质混合物的高效分离方法主要有二维电泳和高效液相色谱两种方法。其中因分离度高并具有直观图谱而被普遍采用的方法为二维电泳，即2DE方法。2DE与质谱联用技术已经成为蛋白质组学研究中一个较为成熟的技术平台
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，被广泛应用于蛋白质组学研究的各个方面。但由于该技术所固有的缺陷：(1)在二维凝胶电泳图谱上,并不是每个蛋白点所包含的蛋白量都足以用于鉴定蛋白；(2)对于低丰度蛋白、疏水性蛋白、极碱性蛋白(pI>10)、一些极大蛋白(相对分子质量>)和极小蛋白(相对分子质量<8000)，二维凝胶电泳还不能够将其很好地显示出来，仅仅只有一些可溶的蛋白被用于研究；(3)费时、费力,而且不容易自动化④，因此近几年对该方法进行了一些改进，如对电泳前生物样品进行预浓缩和预分离、分步提取以及对凝胶的染色过程进行优化，但都未有实质性的进展。为了解决这种方法存在的问题，另一种高效分离方法，高效液相色谱方法(HPLC)获得了愈来愈多的应用，特别是各种模式色谱联用组成多维色谱分离技术逐渐被采用，并与质谱联用以克服二维凝胶电泳存在的缺陷。常见的有高效离子交换色谱、反相高效液相色谱、高效凝胶过滤色谱、高效亲和色谱、高效疏水色谱等技术。
三、色谱技术应用实例
色谱法已广泛用于各个领域，如石油化工、有机合成、生理生化、医药卫生、环境保护以及空间探索，是多组分混合物首选的分离分析方法。以《中国药典》2005版为例，一部收载中药1146个品种，用薄层色谱进行鉴别或含量测定的有1523项，用高效液相色谱进行定量分析的有479种518项，用气相色谱进行检测的有47种。二部收载的有1967个品种，采用高效液相色谱法的品种有848种。现在色谱法已形成一门专门的科学。
1、离子交换色谱法分离蛋白质( High- performance Ion Exchange Chromatography, HPIEC)
高效离子交换色谱（HPIEC）是根据蛋白质分子在一定pH值和离子强度条件下所带电荷的差异进行分离的方法。由于HPIEC是一个吸附性的梯度洗脱过程，所以具有很好的负载力。近年来已成为分离检测蛋白质的重要方法，而选择聚合物离子交换剂作为离子交换色谱填料，具有稳定性好、离子交换容量大、对蛋白质的分离有选择性等特点。但同时，由于离子交换树脂固定床的床层压力会随着分离过程的进程而不断加大，需要重新填充，会造成固定床填充过程操作麻烦，对密封性要求较高。不过，规模化分离纯化蛋白质过程，使用这种方法，还是具有一定优势的。