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琼脂糖凝胶浓学习教案.pptx


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1电泳概述

带电颗粒在电场的作用下,向着与其电性相反的电极方向移动,这种现象称之为电泳(electrophoresis,简称EP)。
电泳技术就是根据各种带电粒子在电场中迁移速度的不同而对物质进行分离的一类实验技术。
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2电泳的基本原理

溶液中任何物质由于其本身的解离或表面吸附其它带电质点而带电,在电场(diàn chǎng)中就会发生迁移,移动方向取决于它们的带电符号。
NaCl → Na+ + Cl –
生物大分子如蛋白质、核酸、多糖等常以颗粒分散在溶液中,它们的净电荷取决于溶液终的H+浓度
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(mobility)
如果把生物大分子的胶体溶液放在没有干扰的电场(diàn chǎng)中,使带电颗粒具有恒定迁移率的驱动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E,即:
F = QE (1)
带电颗粒在迁移中同时受到来自于介质的摩擦力F’,对于球形颗粒来说,在自由溶液中此阻力服从Stock定律:
F’ = 6π r η v (2)
这里v是在介质粘度为η的溶液中,半径为r的带电颗粒的移动速度。但在凝胶中,这种阻力并不完全符合Stocks定律。F’还取决于介质中的其它因素如凝胶厚度、颗粒大小和介质的内渗等。
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当带电颗粒达到稳态运动时,F=F’,由(1)、(2)式推导出:
v Q
——— = ———— (3)
E 6πr η
不同的带电颗粒在同一电场(diàn chǎng)中运动速度不同,其泳动速度用迁移率(或称泳动度)m来表示,定义为在电位梯度E(V/cm)的影响下,颗粒在时间t(s)中迁移距离d(cm),即在单位电场(diàn chǎng)强度(1 V/cm)时的泳动速度:
 
v d
m = —— = ——— (4)
E t·E
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将(3)代入(4),得到
Q
m = ———— (5)
6πr

由上式可看出电泳迁移率与球形分子、介质粘度、颗粒所带电荷有关。在确定的条件下,某物质的迁移率为常数,是该物质的物化特性(tèxìng)常数。从(4)式可以导出迁移率的单位是cm2·s-1·V-1。
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(dài diàn)颗粒的移动速度v与电位梯度E、电流密度J和导电性K的关系
如果在同样实验条件下对某蛋白溶液做两个电泳试验,一个试验用两倍的时间一倍的电压,另一个试验用一倍的时间两倍的电压,从理论上讲,这两个试验中蛋白质的迁移距离应该是相等的。但是实际上只能是大致相等,原因是在电泳过程中还有其他因素的干扰,如在增加电压的同时也增加了热效应。移动的速度决定于其分子的形状、相对分子质量的大小、分子带电(dài diàn)性质及数目,还与分离介质的阻力、溶液粘度及电场强度等因素有关。
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我们(wǒ men)把带电颗粒的移动速度用以下公式表示
v = m·E= m·J/K (6)
由此可以看出,带电颗粒的移动速度v等于电位梯度E和迁移率m的乘积,与电流密度J和迁移率m的乘积成正比,与溶液的导电性K成反比。也就是说,电场强度越高电泳速度越快;溶液的导电性越强,电泳速度越慢。因此电泳速度随着电位梯度或溶液的导电性的变化而改变。
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3电泳的分类

(1)区带电泳(zone electrophoresis,ZEP):是在半固相或胶状介质上加一个

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