法医病理学组织切片制作.ppt

法医病理学组织切片制作
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HE染色切片
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一、目的要求
掌握取材、固定、水洗、脱水、透明、浸蜡与包埋，切片制作。
（一）取材
，新鲜，防止组织腐败。
2定液配制：甲醛1份与9份自来水混合即为10％（4%）浓度的甲醛固定液。
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优点：①渗透力较强；②组织收缩小；③细胞核染色较好。
缺点：
①质量较差的formalin在低温下久存容易产生一种白色的沉淀物称“三聚甲醛”（付醛），经氧化成为甲酸而使溶液呈酸性，影响细胞核染色。可在备用甲醛溶液中放入适量的碳酸钙或碳酸镁，简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或者白色粉笔作为中和剂。
②酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒状物，称为福尔马林色素，在切片上形成黑色小颗粒，不溶于水和酒精，影响染色效果和切片的观察。
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去掉福尔马林色素颗粒方法：
① Schridde法
25％氨水 l ml
75％酒精 200 ml
切片脱蜡经70％酒精时，用上液浸泡半小时或稍长一些时间，然后水洗再行染色。
②Verocay法
l％氢氧化钾水溶液 l ml
70％酒精 100 ml
切片脱蜡经酒精80％时入上液处理10分钟，经70％酒精入水后即可染色。
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（三）水洗
，彻底清除组织块中的固定液。
。
、大小可灵活掌握水洗工具，可用水洗
筐或用纱布包裹，防止水流过大将组织块冲掉或丢失。
(四)脱水
组织块固定后虽然已经硬化，但达不到切薄片的硬度，必须制成石蜡组织块，脱水是继固定后的重要步骤。
  经固定和水洗后的组织含大量水分，在这种情况下首先必须除去组织内部的水分，这种除水的过程叫做脱水，脱水使用的药剂称为脱水剂。
脱水必须逐渐依次从低浓度酒开始到高浓度酒，否则引起组织强烈收缩，变脆不利制片。脱水不彻底也很难浸进石蜡。
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常用脱水剂：溶于水和透明剂的试剂，如酒精、丙酮、正丁醇等。
（1）酒精
步骤：70％ 80％ 90％ 95％ 100％Ⅰ
100％Ⅱ，一般数小时到12小时，更换一次酒精。
配低浓度酒精时，可用市售95％酒精配制。70％酒精：95％酒精70ml加蒸馏水25ml至95ml；80％酒精：95％酒精80ml加蒸馏水至95ml，依次类推。
（2）丙酮
脱水作用与酒精相似，虽其脱水作用比酒精强，但可引起组织块的收缩较，价钱较贵，故不宜用于一般组织脱水，它即有脱水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脱水1～8小时即可。
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（五）透明
目的：因为酒精与蜡不能相交换需要借助石蜡诱导剂的媒介作用。石蜡诱导剂渗入之后组织块往往呈现透明状态，习惯上将石蜡诱导剂渗入组织内的过程叫透明，用于透明的试剂称为透明剂。
透明时间：根据组织块的大小而定，一般20分钟至1小时。组织块过大可延长透明时间，透明好的材料如同油炸的感觉呈透明状。
透明剂：二甲苯、氯仿、甲苯、香柏油等。最常用二甲苯。
二甲苯：无色透明有机溶媒，有很强的刺激气味，易挥发，长期接触对粘膜有刺激作用，透明作用很强，可使组织收缩变形，透明时间不宜过长。如遇到组织块内部或某一个部位呈白色混浊状态时说明脱水不彻底，如果造成透明不彻底应退回到100％酒精中重新透明。
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六、浸蜡与包理：
浸蜡的目的：为了能制作薄切片做准备，将透明好的组织块浸到融化的石蜡中，使石蜡渗透到组织细胞内，将组织细胞内的二甲苯完全彻底地取代出来，再用石蜡将组织包埋，冷却后，切成小块，修整好切面，这一过程为浸蜡与包埋。
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具体操作：
（一）浸蜡
石蜡箱温度58℃～60℃左右，内有标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的蜡杯或蜡缸，从透明的二甲苯Ⅱ取出组织块，放入Ⅰ号蜡杯中2h～3h，再将组织块移入Ⅱ号蜡杯（纯蜡）2h～4h，再移入Ⅲ号蜡杯中（纯蜡）半天或者稍降蜡箱温度过夜，最后用融化的纯蜡作为包埋用的蜡。
注意：浸蜡时蜡杯不要颠倒顺序使用，以免脱二甲苯不彻底。如遇特殊情况需要延长浸蜡时间时可降低蜡箱温度或关闭蜡箱，需要时再开。温度越高，时间越长组织块收缩越严重，而且材料脆而不易制作切片。
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