菌落总数、大肠菌群测定方法.docx

菌落总数和大肠菌群测定（固体样品）
药 品：
1、平板计数琼脂
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（ LST）
3、煌绿乳糖胆盐肉汤（ BGLB）
4、氯化钠
设备材料：
烧杯 、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃
棒菌落总数和大肠菌群测定（固体样品）
药 品：
1、平板计数琼脂
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（ LST）
3、煌绿乳糖胆盐肉汤（ BGLB）
4、氯化钠
设备材料：
烧杯 、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃
棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。
一、 准备工作
（指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加）
1、平板计数琼脂培养基准备 用于菌落总数测定
将 三角瓶 放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加
200ml 蒸馏水 搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，
用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨 （LST） 肉汤 用于大肠菌群测定
（a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加 100ml蒸 馏水 搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。
（b）用10ml （毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每 支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。
（ c） 9 支试管分别放入 倒气管 （开口向下） ，排气，盖上硅胶塞。
3、 %的生理盐水 用于样品稀释
将 广口瓶 去皮，称取 氯化钠 加 225ml 蒸馏水，摇匀，用报纸或布包
好，再用橡皮筋扎紧； 同样配制第二瓶。
4、准备 2 个空试管，盖上硅胶塞 用于样品稀释。
5、准备 8 个培养皿，用布包扎好。
6、准备至少3支5ml和1支10ml带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部
可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球） 。
7、准备操作的工具：剪刀 1 把、镊子 1 个、勺子等打开产品包装所需
工具，用布包扎好。
二、使用灭菌锅灭菌
、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。
、将上面准备好的 7 步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口
向下，有棉球的向上。
、盖上灭菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开
始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭） ，通电后，待排气阀放
气 3 分钟后（锅内冷空气已经排完） ，关闭排气阀。
、查看灭菌锅的压力表，当温度升到 121°，压力升到 （兆帕 ）时，
灭菌维持 15 分钟后 （ 温度和压力不能过高或者过低 ） ，断电自然冷却到
接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。
三、无菌操作
进无菌室前的准备：放好工具（酒精灯，记号笔，消毒用 75%酒精
棉球，洗耳球，电子称） ，打开紫外线杀菌灯，杀菌 30 分钟后关闭，再
等 10分钟后进入无菌室。 （无菌室缓冲间应放有：白色衣服、帽子、鞋
子和口罩等） 。
1 、待灭菌锅自然冷却后，取出 6 件灭菌好的物品，留下平板计数
琼脂培养基（PCA）在灭菌锅里待用（该液体凉后会凝固，应保持温度50c 左右） 。
2、用 75%的酒精棉球消毒手和操作台面。
3、点着酒精灯，准备接种，接种过程在酒精灯周围10cm范围进行。
4、无菌操作
A 、拿出第