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酵母菌的分离筛选方法
-CAL-FENGHAL-(YICAI)-Company One 1
酵母菌的分离筛选方法
酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气
条件下，液体培养比霉菌快。菌落与细菌相似，较大而厚，，形成假菌丝。单细 胞，形状有圆形椭圆形等，大小不一。在麦芽汁中，沉淀表面形成 环状膜。不能利用硝酸盐。
产航假丝酵母：在麦芽汁琼脂培养基上菌落为乳口色，平滑，有光 泽或无光泽，边缘整齐呈菌丝状。细胞呈圆形椭圆形和圆柱形等。
能利用硝酸盐为氮源。
实例1:大曲中酵母菌的分离及鉴定
1•富集培养：取5g样品，在试管中加入Wml麦芽汁培养基，同时
加入一滴乳酸摇匀，25・28°C24h,后取1ml菌液转入另Wml麦芽汁 培养基试管中培养25・28C24h,稍长（过长则霉菌长岀）。培养液变 浊产膜或沉淀。观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央 的％美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换 高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。活酵母菌可使美蓝还 原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。
要求：较高的糖50g/h抑菌剂孟加拉红g/L （许多细菌放线菌和
快速生长的霉菌），PH 0或用乳酸（5ml）.马铃薯（200g） •葡萄糖
（20g）培养基富集。
2•酵母菌分离；平板划线涂布或混菌均可。取集菌菌液，梯度稀
释,
取W・5 10・6 W・7,菌液涂布虎红培养基上，25・28°C48h（若
不纯可挑取单菌落连续多次划线）。
3•酵母菌选择：对典型单菌落，经美兰染色，制片镜检，进行描述
记录，然后选择不同菌落转接于麦芽汁斜面，25・28°C48h备用。
4•酵母菌纯化：挑取W・7培养基不同的单菌落，在PDA培养基接种 25・28°C2・3d后，取形态不同的单菌落传接二次，观察菌落形态确
定为单菌落后，分别接种于PDA培养基和MA培养基中，25・28°C
3d,
根据在不同培养基中菌落形态进行初步分类。将所得菌株于斜面培
保存在4C冰箱中。
实例2：高温堆积糟酷中酵母菌的选育 九集菌：同上45C2・3d,依此法转接2-3次，再行分离。
2•分离：梯度菌液分别涂布于麦芽汁获皮汁豆芽汁平板于45C 2・3d,将平皿上生长的菌落划线纯化，菌株移入斜面，备用。
3•有效菌株的确认：分离的数十株酵母经镜检有酵母属的各种酵
母,
假丝酵母，红酵母，口地霉等。用高粱粉糖化液，饴糖稀释液，隸
等进行发酵，测定次生代谢产物，依次判出Y1 Y2 Y3 Y4等与酱香酒
产量质量有关。
4 •菌种的分类鉴定:
形态特征：（麦芽汁琼脂）
编号 形态特征
Yl菌落山口色到奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。边缘呈波纹，凸 起，
色黄，中心凹，奶油色，室温放一月后，培养物山奶油色变浅褐色。细胞呈圆 卵
圆椭圆，大小不等。单个，成双，偶尔成短链，多边芽殖。 （意大利酵母） Y2菌落呈浅奶油色，菌落平滑或部分有皱纹，无光泽，边缘呈黃色，大波纹 状。细胞圆形卵形椭圆形，大小不等，多边芽殖。 （地生酵母）
Y3 28°C3d后，细胞圆形椭圆形，单个或成双，两端芽殖，培养物奶油状，奶 油色到浅褐色，平滑，稍平坦，光亮，边缘偶尔波纹，无真菌丝。（酿酒酵 母）
Y4菌落白色