胶原蛋白肽的制备.doc

胶原蛋白肽的制备
摘要 为了获取分子量较小、皮肤角质层易吸收的胶原蛋白肽,本文以新鲜猪皮为原料,用碱性蛋白酶水解方法制备胶原蛋白肽。结果表明,通过提取制备的猪皮胶原蛋白肽样品显示为淡黄色,而且猪皮的应用效率较高。
胶原蛋白肽的制备
摘要 为了获取分子量较小、皮肤角质层易吸收的胶原蛋白肽,本文以新鲜猪皮为原料,用碱性蛋白酶水解方法制备胶原蛋白肽。结果表明,通过提取制备的猪皮胶原蛋白肽样品显示为淡黄色,而且猪皮的应用效率较高。
关键词 猪皮;胶原蛋白肽;制备方法
中图分类号 文献标识码 A 文章编號 1007-5739(2019)06-0220-01
猪皮,又名猪肤,东汉名医张仲景在《伤寒论》中曾详细记载了猪皮具有活血止血、补益精血、滋润肌肤、光泽头发、减少皱纹、延缓衰老的作用。猪皮中的蛋白质含量比较高,可以达到33%,%[1]。胶原蛋白由于特殊复杂的空间结构,其分子量高达300 kDa[2],很难被机体吸收,通过蛋白酶水解可以将猪皮中的蛋白质水解为肽,其反应温和,产品安全,适用于功能食品、化妆品及其他健康相关产品[3]。同时,胶原蛋白的化学组成、结构赋予了其独特的生理活性,可发挥美白、保湿、防皱、修复、营养、减肥等美容美体作用[4]。胶原蛋白经水解后,其功能特性和生理活性功能将会被改善。胶原蛋白水解产物分子量的分布、疏水性的大小、极性的强弱等主要受水解过程的影响,从而影响胶原蛋白肽的活性功能[5]。研究表明,胶原蛋白肽的分子量一般在1~3 kDa时,其抗氧化活性、抑制皮肤黑色素生成、延缓皮肤老化和抑制紫外线损伤等功效是比较显著的[6]。
我国猪皮生物资源极为丰富,本研究以新鲜猪皮为原料,采用碱性蛋白酶酶解法提取分子量相对较小、皮肤角质层易吸收的胶原蛋白肽,并验证其对皮肤的美容保湿等功效。
1 材料与方法
试验材料
猪皮,购于杨凌好又多雨润专卖店。
试剂与仪器
试剂:碱性蛋白酶(8 500 u/g)为还原型谷胱甘肽,购于美国sigma公司;食用碱面(食品级);三氯乙酸、氯化钠,均为分析纯。
仪器:UV-2450型紫外可见分光光度计(日本岛津仪器有限公司);RE-52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);H1650型离心机(湖南湘仪离心机仪器有限公司);HH-S4型电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)。
试验方法
胶原蛋白肽的提取。提取流程:新鲜猪皮→剔脂→洗涤→切碎→回流→酶水解→灭酶活→离心分离→真空抽滤→蒸发浓缩→胶原蛋白肽浓缩液。具体操作步骤:①选取皮下脂肪含量少、皮质较透明的新鲜猪皮作为原料,将猪皮去污,刮去毛根,剔除皮下脂肪,切成3 mm×3 mm左右的小块,用40 ℃的蒸馏水清洗2次。②将处理后的猪皮装于锥形瓶中加入2%NaCl(猪皮与2% NaCl的质量体积比为1∶8),于常温下放置8 h,取出猪皮中的杂蛋白。③按猪皮重量的7倍加入蒸馏水,升温至100 ℃回流蒸煮1 h