实验六细菌荚膜染色法.ppt

实验六细菌荚膜染色法
实验的目的要求
学习并掌握荚膜染色法
荚膜染色的基本原理
荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。
由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于实验六细菌荚膜染色法
实验的目的要求
学习并掌握荚膜染色法
荚膜染色的基本原理
荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。
由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托法染色(负染色法),使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。
也可采用Anthony氏染色法，用结晶紫使细胞和荚膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗。荚膜被脱色，但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体区分。
实验材料
菌种
褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌
试剂
绘图墨水
1%甲基紫水溶液
6%葡萄糖水溶液
20%硫酸铜水溶液
甲醇
香柏油
二甲苯
仪器和用具
载玻片
盖玻片
滤纸
显微镜
镜头纸
方法
湿墨水法
干墨水法(P78)
Anthony氏法(P79)
湿墨水法
制备细菌墨水混合液
加盖玻片
镜检
制备细菌墨水混合液
1、滴绘图墨水
2、制备混合液
绘图墨水
滴1滴绘图墨水在载玻
片中央
挑取少量菌苔
与墨水混
合均匀涂布
加盖玻片
在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液
1、加盖玻片
将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片
2、吸去多余液体
勿留气泡
镜检
1、镜检
用低倍镜高倍镜观察
制片置显微镜载物台上
2、结果：
背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。
镜检
1、镜检
用低倍镜高倍镜观察
制片置显微镜载物台上
2、结果：
背景灰色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。
Anthony氏法
制片
固定
染色
镜检
制片、固定
生理盐水
1、滴生理盐水
挑取少量菌苔
与生理盐水混匀
均匀涂布
2、涂片
滴半滴生理
盐水在载玻
片中央
3、干燥固定
室温自然晾干
染色
1%结晶紫染液
1、滴孔结晶紫染液
滴结晶紫染
色2分钟
3、脱色
20%CuSO4水溶液
镜检
1、镜检
用低倍镜高倍镜观察
制片置显微镜载物台上
2、结果：
背景灰色，菌体深紫色，菌体周围荚膜淡紫色。
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