6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconatedehydrogenase,6-PGDH)说明书.doc

货号：QS1106规格：50管/48样
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-phosphogluconatedehydrogenase，6-PGDH）说明书
紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：
磷货号：QS1106规格：50管/48样
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-phosphogluconatedehydrogenase，6-PGDH）说明书
紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：
磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH和6PGDH依次催化NADP合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGD逆境生理中具有重要作用。
测定原理：
6PGDHS化6-磷酸葡萄糖酸和NADf生成NADPHNADP在340nm有特征吸收峰，而NADP没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH6性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体XI瓶，4C保存。
试剂二：粉剂XI瓶，4C避光保存。临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。试剂三：粉剂XI瓶，4C保存。临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。
粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）:试剂一体积（mL）为1：5~10的比例（，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g,4C离心10min,取上清置冰上待测。
细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000:1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w,超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g,4C,离心10min,取上清置于冰上待测。
血清、培养液等液体：直接测定。
测定操作：
分光光度计预热30min,调节波长到340nm,蒸馏水调零。
试剂一置于25C或者37C水浴预热30min。
空白管：取1mL石英比色皿，依次加入100卩L蒸馏水，100卩L试剂二，700卩L试剂一，100卩L试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A20^A空白管=A2-A1
测定管：取1mL石英比色皿，依次加入100卩L粗酶液，100卩L试剂二，700卩L试剂一，100卩L试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3,第190s吸光值记为A4AA测定管=A4-A3
注意：空白管只需要做一次。
计算公式：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmolNADPH勺酶量为1个酶活单位。
6PGDH酶活性（nmol/min/mgprot）=［（△A测定管-△A空白管）XV反总
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-£-dx109］-（CprXV样）十T
=（△A测定管-△空白管）十Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmolNADPF的酶量为1个酶活单位6PGD酶活性（nmol/min/g）=［（△A测定管-△空白管）XV反总十&-dx1