高效液相色谱 (4).ppt

高效液相色谱
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高效液相色谱与其他仪器相比特点：
（1）高压
（2）高速
（3）高效
（4）高灵敏度
3-1 高效液相色谱法概述
第2页，共60页，编辑于2022年，星芳烃、稠环芳烃及烷烃等化合物。
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正相色谱固定相：硅胶、三氧化铝以及载有醇基、氨基和氰基的固定相。流动相选用非极性流动相，如：正已烷或环已烷
正相色谱依据溶剂极性差别达到分离目的。
反相色谱固定相：非极性载体。固定相以硅胶为基质，将不同疏水基团通过化学键合到硅胶表面的游离羟基上（如键合C18烷基的非极性固定相，为C18柱）
大多数有机化合物都存在疏水基团，因此，反相色谱较为普遍。
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在液液色谱中，除一般要求外，还要求流动相对固定相的溶解度尽可能小，因此固定液和流动相的性质往往处于两个极端，例如当选择固定液是极性物质时，所选用的流动相通常是极性很小的溶剂或非极性溶剂。
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液—固吸附色谱法
液固色谱法是根据各组分在固定相上的吸附能力的差异进行分离。
吸附剂是一些多孔的固体颗粒物质，吸附试样的能力，主要取决于吸附剂的比表面积和理化性质，试样的组成和结构以及洗脱液的性质等。
一、液固色谱法固定相
酸性吸附剂：硅胶、硅酸镁
碱性吸附剂：氧化铝 氧化镁
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流动相：液体
固定相：吸附剂（主要是多孔物质，如硅胶、氧化铝、硅藻土等）
适合分离中等相对分子质量（200＜M＜2000），能溶于非极性或中等极性溶剂的脂溶性样品的分离。凡能在薄层上成功分离的化合物，也可用液固色谱分离。
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固体吸附剂按其性质可分为极性和非极性两种
极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、
硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。
非极性吸附剂最常见的是活性炭。
各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝
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液固色谱法流动相必须符合下列要求：
（1）能溶解样品，但不能与样品发生反应。
（2）与固定相不互溶，也不发生不可逆反应。
（3）粘度要尽可能小，这样才能有较高的渗透性和柱效。
（4）应与所用检测器相匹配。例如利用紫外检测器时，溶剂要不吸收紫外光。
（5）容易精制、纯化、毒性小，不易着火、价格尽量便宜等。
在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是 极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。
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(1) 分离机理
试样中的离子与离子交换树脂上的离子发生反应：
阳离子交换：树脂—SO3-H++M+=树脂—SO3-M ++H +
阴离子交换：树脂—NR4Cl-+X-=树脂—NR4X -+Cl -
不同的离子与树脂离子的交换能力（亲和能力）不同，亲和力越大，离子越难洗脱，从而得以分离。
离子交换色谱法（ion exchangechromatogrephy,IEC）
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离子交换色谱法（ion exchangechromatogrephy,IEC）
固定相：带有离子交换功能的基团，是在交联的高分子骨架上结合可解离的无机基团。
离子交换剂的本体结构不发生明显变化，而是其上带有的离子与外界同电性的离子发生等量离子交换。
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由薄壳型或全多孔球型微粒硅胶表面键合上各种离子交换基团制成，如在树脂上键合－SO3H基团（树脂－SO3H），可交换基团H＋
不同样品离子对离子交换树脂所带电荷的结合力不同，使洗脱剂可以借助逐渐升高离子浓度（即离子梯度）的方式，使结合力弱的离子先流出，结合力强的后洗脱。
离子交换色谱法（ion exchangechromatogrephy,IEC）
SO3H + M+
SO3M + H+
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离子对色谱（ion pair chromatography）
离子对色谱：将一种（或多种）与溶质分子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。
分为正相离子对色谱、反相离子对色谱
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固定相、流动相和离子对试剂
固定相：多为C18,C8反相键合相
流动相：以水为主的缓冲液，或水-甲醇、水-乙腈等混合溶剂