PDA培养基的配制方法.doc

PDA培养基的配制方法
PDA培养基的配制方法
一、目的要求
1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2．学习并掌握棉塞的制作方法。
二、培养基的配制原理
培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培培养基常用于分离菌种、菌落计数、菌落形态观察及菌种鉴定等。斜面与平板培养基的制作过程大致为：溶解原料、融化琼脂、调PH、分装、灭菌和制斜面或平板。
1、溶解原料
为加速原料的溶解，最好用热水。先将原料依次加入到占配制量一半的水中，待全部溶解后在加足水量。如配方中有马铃薯、麸皮、胡罗卜、豆芽等天然原料，需将其熬制约30min，取出定量滤液，在将所需的其他原料加入滤液中。
2、融化琼脂
琼脂的用量可灵活掌握。用作保藏菌种的培养基，%，以增加持水性。冬季的气温低，琼脂用量可适当减少。琼脂用前可剪成小段，以利于融化。待溶液煮沸是再加入，不断搅拌至完全无琼脂块状物时再停止加热。
3、调整PH
用洁净干燥的玻璃棒沾一点培养基滴在试纸上，立即与比色板比较。一般用10%NaOH或HCl调节。
4、分装
将培养基趁热倒入垫有纱布的漏斗中，使培养基直接滤至试管或三角瓶中，试管装量一般为管高的1/4左右，三角瓶的装量约为其容量的一半。勿使培养基玷污容器口部。口部塞有棉塞，试管每7或9 支扎一捆，棉塞外面包牛皮纸，以防在灭菌过程中被水汽打湿。
5、灭菌
分装后的培养基应随即灭菌。除特殊情况外，一般培养基均用高压蒸汽灭菌，在104kPa压力下，灭菌20-30min 。
6、制作斜面或平板
将灭菌后的试管趁热斜置于棍条上，倾斜度以试管中的培养基约占试管长度的1/2为宜，凝固后即成斜面培养基。待灭菌后三角瓶内的培养基冷却至45~50时，以无菌操作法向无菌培养皿中倒入培养基，装置以刚覆盖整个培养皿底部为宜（约15ml）,凝固后即成平板培养基。
五、高压蒸汽灭菌法
该法使用高压灭菌锅，在121℃，O．105MPa压力下灭菌15～30min。微生物实训所需的一切器皿、器具、培养基(不耐高温者除外)、无菌水、工作服等物品都可用此法灭菌。
高压蒸汽灭菌锅是能耐一定压力的密闭金属锅，有立式或卧式(实图8-1、2 )两种。
灭菌锅上附有压力表、排气阀、安全阀、加水口、排水口等。卧式灭菌锅还附有温度计。有的还有蒸汽人口。灭菌锅的加热源有电、煤气和蒸汽三种。
高压蒸汽灭菌的操作过程
(1) 加水 将灭菌锅内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，以水面与三角架相平为宜。立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1／3处。有加水口者由加水口加入至止水线处。
(2) 装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。放置装有培养基的容器时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。
(3) 加盖 摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，打开排气阀。
(4) 排气 用电炉或煤气加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出。一般认为，当排气流很强并有嘘声时，表明锅内空气已排净(沸后约5min)。
(5) 升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。

实图7