实验苯甲醇苯甲酸水扬酸酸测定.ppt

实验课件苯甲醇苯甲酸水扬酸酸测定
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第1页，共22页，编辑于2022年，星期六
一、实验目的：
1、掌握毛细管电泳的基本概念；
2、通过实验熟悉毛细管电泳仪的基本原理和操作；
3、了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数。
于2022年，星期六
分离过程
电场作用下，毛细管柱中出现：电泳现象和电渗流现象。
带电粒子的迁移速度=电泳+电渗流；两种速度的矢量和。
正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；
中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出；
阴离子：两种效应的运动方向相反。ν电渗流 >ν电泳时,阴离子在负极最后流出。
在这种情况下,不但可以按类分离, 同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。
（动画）
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三、高效毛细管电泳(HPCE)基本原理
（保留时间）
HPCE兼具有电化学的特性和色谱分析的特性。有关色谱理论也适用。
V—外加电压；L—毛细管总长度；
（塔板数）
在HPCE中，仅存在纵向扩散，σ2=2Dt
扩散系数小的溶质比扩散系数大的分离效率高，分离生物大分子的依据。
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影响分离度的主要因素；工作电压V；毛细管有效长度与总长度比；有效淌度差。分离度可按谱图直接由下式计算：
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高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进：
电压升高，电场推动力大； 柱径小，柱长增加。
高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。
一、采用了 75um 内径的毛细管；
二、采用了高达数千伏的电压。
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高效毛细管电泳法的特点
、易自动化
电源、毛细管、检测器、溶液瓶
、分离效率高
，；
、消耗少
进样量极少，水介质中进行；

有机物、无机物、生物、中性分子；生物大分子等；
分子生物学、医学、药学、化学、环境保护、材料等；
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四、仪器结构及主要部件
紫外或激光诱导荧光检测器；
（可检测到：10-19～10-21 mol/L）
1. 高压电源
2. 毛细管柱
3. 缓冲液池
4. 检测器
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（1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源；
（2）具有恒压、恒流、恒功率输出；
（3）电场强度程序控制系统；
2. 毛细管柱
（1）材料：石英（分离柱不涂敷任何固定液）各项性能好；
（2）规格：
内径 20～75μm，外径350～400μm；长度≈1m
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化学惰性，机械稳定性好；
4. 检测器
要求：具有极高灵敏度，可柱端检测；
检测器、数据采集与计算机数据处理一体化；
类型 检测限/mol 特点
紫外 10-13～10-15 光谱信息
荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生
激光诱导荧光 10-18～10-20 灵敏度极高，样品需衍生
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1. 离子分析
analysis of ion
2. 药物分析
analysis of pharmaceutics
3. 氨基酸分析
analysis of amino acids
4. 核酸分析及DNA测序
analysis of nucleic acids and sequence of DNA
5. 新进展及热点问题
advances and special topics
高效毛细管电泳应用与进展
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1. 离子分析
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2. 药物分析
检测体液或细胞中某些代谢产物的分析；
尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段；
采用毛细管区带电泳方式，在11min内分离17种药物；
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3. 氨基酸与蛋白质分析
可分离23种丹酰化氨基酸；
HPCE可取代传统的氨基酸分析仪；
问题：吸