实验三 红细胞计数、血红蛋白测定及白细胞分类计数--上课用.ppt

红细胞计数、血红蛋白测定及白细胞分类计数红细胞计数(一)原理用等渗稀释液将血液稀释并充入计数池后, 于显微镜下计数。(二)试剂与器材 Hayem 液(氯化高汞、氯化钠、结晶硫酸钠) 血细胞计数板(三)操作 2ml 稀释液+10 ul血液,洗涤,振荡,混匀,充池,高倍镜计数中央大方格周围四个及中央五个中方格内细胞总数。(四)计算细胞数/5× 25 × 10 × 200 × 10 6 =细胞数/100 × 10 12 /L (五)质量保证 ; 2. 稀释倍数不准 ; 4. 混合不均匀,充液不当 ,红细胞易聚集。(六)临床意义 1、增多(1)相对性增多(2)绝对性增多(3)真性红细胞增多症 2、减少(1)造血物质减少(2)红细胞破坏过多(3)红细胞丢失过多( 4)骨髓造血功能衰竭 3、红细胞计数和血红蛋白测定的关系二、血红蛋白测定( 法) (一)原理?血细胞经血红蛋白转化液溶血后,除 SHb 外, 其他血红蛋白均被高铁氰化钾氧化成 Hi, —结合生成稳定的氰化高铁血红蛋白。它的最大吸收峰在 540 nm ,测定 A,得血红蛋白浓度。?(二)试剂、器材?文齐氏液、 721 分光光度计(三)操作 5 ml 血红蛋白转化液+20 ul血液,振荡,混匀, 5 min 后 721 分光光度计上测定。波长 540 nm 。转化液调零, 1 cm 比色杯。(四)结果报告 1. A/44 /1 × 64458/1000 × 251=A × ( g/L ) 2.. 标准曲线法测定参考标准品的 A值,以 Hb 浓度为横坐标, A值为纵坐标,绘制通过零点的曲线,查表。 3. K值法: K=Hb 总和/A值总和 Hb 浓度= A ×K (五)质量保证 ,白细胞异常增多, SHb 疾病时,测定液体发生浑浊,可增加 NaCl , 消除影响。 35 ml ,敞开过夜。 CN -氧化成 CO 2和N 2,或水解 CO 3 2-和 NH 4 +。 3、对分光光度计相关参数的校正。