流式细胞术的原理和临床(2002)1 PPT课件.ppt

流式细胞术在细胞生物学中的应用
一、细胞周期分析
细胞周期分为DNA合成准备期(G1)、DNA合成期(S期)、分裂准备期(G2)以及分裂期(M期)。此外,如细胞停止增殖称为静止期(G0)期。由于DNA在各期中不同,可以确定G1/G0、S、G2/M各期的百分比。使用特定荧光染料如PI对细胞的DNA染色,用流式细胞仪分析细胞中DNA的含量。
溴脱氧脲嘧啶核苷替代胸腺嘧啶脱氧核苷参与DNA的合成,测定DNA的合成速率。
异染性荧光染料AO,同染DNA、RNA识别G0/G1期。
、癌基因及抗癌基因蛋白
对细胞周期调节机理研究进展较快,真核细胞的增殖是控制在细胞周期的特定阶段,特别是在G1到S期以及G2到M期移行部位。Cyclin(周期蛋白)作为Cyclin依赖性cdk复合体的调节亚单位,对细胞周期起重要的调节作用。
Cyclin家族中有8种CyclinA、B、C、D、E、F、J、H。Cyclin A、B、F及E在细胞周期中不间断的表达。这些蛋白质合成及降解构成了细胞周期的特征性。
A是一稳定的细胞周期相关性核蛋白,在G1期和S早期,PCNA水平升高2~3倍,在G2期保持低值。
Ki-67核抗原可见细胞周期全过程,而静止期G0无表达。
C-erB-2,产物是分子量为190KD跨膜糖蛋白,其结构类似于表皮生长因子受体,过表达C-erb常常与肿瘤细胞较快增生及病人预后有关,使用FCM可测定C-erb-2在乳腺癌等中的表达,并可进而分析与病人预后的关系。
MYC基因家族由C-MYC、N-MYC及L-MYC构成,也是与细胞增殖有关的癌基因,最近的研究提示MYC基因与凋亡的诱导有关。
P53已被认为是一种抗癌基因。野生型P53蛋白是一种细胞生长抑制物,能阻断细胞周期循环。人类的许多恶性肿瘤中,可见P53突变,用FCM可以测定P53在癌细胞内表达,从而评估诊断和预后。
P53 Tumour Suppressor Gene
Human p53 Protein –Antibody Mapping Sites
+测定
Ca2+除了作为细胞内许多关键和功能蛋白的辅基之外,还是重要的细胞内信使,测定细胞内Ca2+的变化,对于了解细胞内信息传递,细胞调亡等都有一定的意义。使用Ca2+特异的Fluo—3染料标记细胞可用FCM测定Ca2+的变化。
用SNARF—1标记细胞,用FCM可测定细胞内PH,例如癌细胞在受到加热或化疗细胞内PH下降。


细胞死亡在多细胞生物通过两种机理而产生,即凋亡和坏死。凋亡不仅与个体形成等基本生命现象有关,而且与癌、AIDS等多种疾病的发生密切相关。电泳分析可见DNA呈阶梯状改变。使用FCM能精确定量凋亡细胞,同时可进行多参数分析。