基因治疗的原理.ppt

基因治疗的原理
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一、基因治疗的策略
内容提要
二、基因转移技术
三、基因干预
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一、基因治疗的策略
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（一）基因置换（g胞膜上的特异性受体识别，从而使逆转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细胞。
②逆转录病毒结构基因gag、env和pol的缺失不影响其他部分的活性。
③前病毒可以高效整合至靶细胞基因组中，有利于外源基因在靶细胞中的永久表达。
④包装好的假病毒颗粒（携带目的基因的重组逆转录病毒载体）以芽生的方式分泌至辅助细胞培养的上清液中，易于分离制备。
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逆转录病毒载体的主要缺点
随机整合，有插入突变、激活癌基因的潜在危险；
逆转录病毒载体的容量较小，只能容纳7 kb以下的外源基因。
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（2）腺病毒(adenovirus，AV)载体

腺病毒是一种大分子(36 kb)双链无包膜DNA病毒。它通过受体介导的内吞作用进入细胞内，然后腺病毒基因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整合进入宿主细胞基因组中。
腺病毒是人类呼吸道感染的病原体，但目前尚未发现与肿瘤发生有关联。宿主细胞范围广，可感染分裂和非分裂终末分化细胞，如神经元等。
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腺病毒载体的优点
，对人类安全；
；
；
、或喷雾吸入或气管内滴注；
， kb外源基因；
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腺病毒载体的缺点
。
。
。
。分裂增殖快的细胞，导入的重组病毒载体，随分裂而丢失的机会增多，表达时间相对较短。
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（1）脂质体介导的基因转移技术
脂质体介导的基因转移技术使用方便、成本低廉。
基本原理:利用阳离子脂质体单体与DNA混合后，可以自动形成包埋外源DNA的脂质体，然后与细胞一起孵育，即可通过细胞内吞作用将外源DNA（即目的基因）转移至细胞内，并进行表达。
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（2）受体介导转移技术
将DNA与细胞或组织亲和性的配体偶联，可使DNA具有靶向性。这种偶联通常通过多聚阳离子（如多聚赖氨酸）来实现。多聚阳离子与配体共价连接后，又通过电荷相互作用与带负电荷的DNA结合，将DNA包围，只留下配体暴露于表面。这样形成的复合物可被带有特异性受体的靶细胞吞饮，从而将外源DNA导入靶细胞。
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（3）基因直接注射技术
不需要进行基因工程的繁琐操作，直接将裸露基因DNA注入动物肌肉或某些器官组织内。
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三、基因干预
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基因干预的种类：
(antisense RNA)
(RNA interference)
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（一）反义RNA
1. 反义RNA与基因表达调控
利用反义RNA对体外培养的细胞进行基因表达调控，通常采用的方法有两种：
（1）体外合成反义RNA，直接作用于培养细胞，细胞吸收RNA后，发挥作用。
（2）构建能转录反义RNA的重组质粒，将质粒转入细胞，转录出反义RNA而发挥作用。
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基本原理：将脱唾液酸血清类粘蛋白（ASGP）与多聚赖氨酸（PL）共价连接，得到ASGP-PL复合物，成为运载核酸的工具。ASGP-PL反义RNA复合物可以专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所识别，并吞噬到肝细胞中，反义RNA进入肝细胞后，可被逐渐释放出来发挥作用。
借助受体介导DNA转移方法把DNA换成反义RNA， 就可以实现受体介导的反义RNA的转移。
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（二）干扰RNA

RNA干扰（RNA interference， RNAi）是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象。在此过程中，与双链RNA有同源序列的信使RNA（mRNA）被降解，从而抑制该基因的表达。
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RNA干扰过程主要有2个步骤：
（1）小干扰性RNA（siRNA）
（2）siRNA与