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高效液相色谱法
1简述
高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵人装有填充剂的色谱柱，对不允许使用含不挥发性盐组分的流动相。
-水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般不低于5%,否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。
正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己
各品种项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、填充剂粒径、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应供试品并达到系统适用性试验的要求。其中，调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变范围为〜；当X大于33%寸，允许改变范围为X-10%»X+10%
若需要用小粒径（约2卩m）填充剂，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也应作适当的调整。当对其结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。
对于必须使用特定牌号的填充剂方能满足分离要求的品种，可在该品种正文项下注明。
系统适用性试验
色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、重复性和拖尾因子等五个参数。
按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，应符合要求。
(n)用于评价色谱柱的效能。由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。
在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR和峰宽(W)或半高峰宽(Wh/2)，按n=16(tR/W)2或n=(tR/Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。tR、W、Wh/2可用时间或长度计(下同)，但应取相同单位。
(R)用于评价待侧组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标•可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测组分与某一添加的指标性成分(内标物质或其他难分离物质)的分离度，或将供试品或对照品用适当的方法降解，通过测定待测组分与某一降解产物的分离度，对色谱系统进行评价与调整。
无论是定性鉴别还是定量测定，均要求待测物质色谱峰与内标物质色谱峰或特定的杂质对照色谱峰及其他色谱峰与相邻色谱峰之间有较好的分离度。除另有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于。分离度的计算公式为R=2(tR2一tRl)/(Wl+W2)
或R=2((tR2一tRl)/(Wl..h/2+W2..h/2)
式中，tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tRl为相邻两峰中前一峰的保留时间；W1、W2及W仁h/2、W2..h/2分别为此相邻两峰的峰宽及半高峰宽。
当对测定结果有异议时，色谱柱的理论板数(n)和分离度(R)均以峰宽(W)的计算结果为准。
，色谱系统响应值的重复性能。采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于％;采用内标法时，通常配制相当于80%.100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子。其相对标准偏差应不大于％。
(T)用于评价色谱峰的对称性。拖尾因子计算公式为：
T=2di
式中，为5%峰高处的峰宽；di为峰顶在5%峰高处横坐标平行线的投影点至峰前沿与此平行线交点的距离。
以峰高作定量参数时，除另有规定外，〜之间。
以峰面积作定量参数时，一般的峰拖尾或前伸不会影响峰面积积分，但严重拖尾会影响基线和色谱峰起止的判断和峰面积积分的准确性，此时应在各品种正文项下对拖尾因子作出规定。
，通常以信噪比(S/N)来表示。通过测定一系列不同浓度的供试品或对照品溶液来测定信噪比。定量测定
作业指导书
指导书编号TYFDC-SOP-FF-028
咼效液相色谱法

第二版
批准李忠华
初审|吴雅凝起草|郭欣