基因工程 介绍一种新技术.docx

随着分子生物学技术的发展，以检测核酸为基础的分子生学技术如
PCRM］、再生式序列复制▽］以及链置换扩增技术阳］等广泛应用于医学和生物学等 领域，在医学诊断和传染病病原体的检测方面发挥了重要的作用。由于核酸的分 子生物学技术需要昂贵的仪器感性高于传统PCR，扩 增时间比PCR缩短一半，。与早期 的LAMP相比，该方法不需要对扩增产物进行电泳，可直接通过肉眼观察反应 副产品（焦磷酸镁）的浊度判定结果，大大简化了操作程序a】。最近，Maed等建 立新型的LAMP技术并对引起牙龈炎的病原体的16sRNA基因进行了检测，可 在30min内检测出含有20个细菌的扩增子，产物不需要进行电泳，只要向扩增 产物中添加荧光染料SYBYGreenE，通过肉眼观察直接判定结果，大大地提高了 检测效率［91。对众多细菌研究结果表明，与传统PCR相比LAMP技术不仅快速、 敏感，而且具有良的特异性［⑸。用LAMP对沙门氏菌亚种肠道菌的39个血清型 220株分离株和沙门氏肠道菌亚种的7株分离株进行了检测，结果显示该方法可 ⑹。Yoshida等用LAMP在检测引起牙龈炎的细菌时加入了 环引物，发现加环引物后敏感性和特异性比没有加环物的高7个数量级⑻。

DNA 病毒
自Ihira等用LAMP成功地检测了人疱疹病毒6型和7型毒株之后【16,171， 又用LAMP对SARSM］、人流感病毒［⑼、新城疫病毒［20］、口蹄疫病毒01等许多 病毒进行了检测性研究。对发病1〜5d的疑似SARS患者研究结果提示，不仅该 方法的诊断准确率高（达到80%），而且快速（在发热首日用该方法就可以诊断出是 否患有非典)。PoonLL等用LAMP检测了人流感病毒(A型)，并对其特异性进行 了鉴定。结果提示人流感病毒分离株H1N1, H2N2和H3N3检测结果均为阳性， 而禽流感病毒H5N1，H6N1和H9N2特异性均为阴性，与常规方法的检测结果 一致［19］。
RNA 病毒
NotomiT等人首先将LAMP与翻转录(RT)相结合建立了单管RT2LAMP技 术，使反转录和等温扩增在同一反应管中进行⑸。而将该技术首先用于RNA检 测的则是FukutaS等人，他们用RT2LAMP检测日本红薯花叶病毒，直接从感染 花叶病毒的叶子、种子、根茎中快速成功地检测出病毒。Hong等建立了新型 LAMP技术即一步快速实时定量RT2LAMP方法并用该方法对49份来自SARS 流行期间采集的SARS患者的样品进行了回顾性研究，结果显示实时定量 RT2LAMP敏感性比传统RT2PCR高100倍以上，，敏 感性的和特异性分别为100%和87%，最早可在反应11min时观察到结果［⑼。 FukutaS等用建立的免疫捕获RT2LAMP，对感染番茄的菊花斑点枯萎病毒进行 了检测，结果表明，该方法的敏感性是免疫RT2PCR(ICoRT2PCR)的100倍。整 个扩增不到1h，结果可用反应副产品焦磷酸镁的浊度来判断，研究还提示加环 引物最早在扩增反应的20min中之内浊度开始增加，而没有加环引物的在反应 50min时才出现浊度增加，说明环引物能增加整个反应的速度。

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