基因定位常用的方法.pdf

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生物秀实验频道——生命科学实验中心 io101
l 44））原理原理：：
细胞细胞进行进行融合融合时时，，培养液中培养液中只只有有部部分细分细
胞胞融合融合成杂成杂种种细细胞，胞，还还有有大大量量未未融合融合的的双双
亲亲细胞。细胞。这就需这就需要要选择选择分分离离纯化纯化杂杂种种细细
胞。胞。为为此此要要创创造造一种只一种只让让杂杂种种细细胞生胞生长繁长繁
殖殖而亲而亲本本细胞细胞死亡死亡的的环境环境。。这就这就要利用杂要利用杂
种种细胞和细胞和亲亲本本细细胞对生胞对生长长条条件件的要的要求求和代和代
谢谢的的差异差异来来进行进行选择选择。。其中其中最最常常用的是用的是HATHAT
选择选择系系统统。。
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HATHAT选择选择系系统统：：
人的突变细胞株：缺乏HGPRT酶
小鼠细胞株：缺乏TK酶
两者融合培养于HAT培养基中
HAT培养基：
H为次黄嘌呤，是HGPRT的底物，为DNA合成提
供原料（核苷酸旁路合成原料）
A可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP合成受抑
制）
T在胸苷激酶（TK）的作用下生成胸腺嘧啶核
苷酸，为DNA合成提供原料
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因因此此在在HHATAT培养培养基上基上
l 人细胞人细胞：：
①①由由于于AA的的存存在，在，正正常的常的DDNANA 合合成成通路受通路受
阻阻 。。
②②同同时由时由于于HGPHGPRTRT的的缺乏缺乏，，无无法法利用次利用次黄黄
嘌呤通过旁路嘌呤通过旁路合合成成DNADNA（（ 嘌呤嘌呤合合成成障碍障碍））
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l 鼠鼠细胞细胞：：由由于于AA的的存存在在正正常的常的DDNANA合合成成通通
道受阻道受阻，有，有HHGPRTGPRT可可以以利用次利用次黄黄嘌呤嘌呤合合成成
腺嘌呤腺嘌呤，，鸟嘌呤鸟嘌呤，，但由但由于于无无TKTK，，无无法法合合
成成胸腺嘧啶胸腺嘧啶。。（（嘧啶嘧啶合合成成障碍障碍 ））
杂杂种种细胞细胞：：有有HGHGPPRTRT旁路旁路合合成成腺腺嘌呤嘌呤,,鸟鸟
嘌呤嘌呤；；并并可可以以利用利用TKTK合合成成胸腺胸腺嘧啶嘧啶（（嘌嘌
呤呤和和嘧啶嘧啶都都可可以以正正常常合合成成））
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l 将将筛筛选选出出来来的杂的杂种种细胞细胞转移转移到到正正常常培培
养养基基继续继续培养培养，，由由于人和于人和鼠鼠都都有有各自各自不同不同
的生的生化化和和免疫免疫学学特特性性，，MilMilllerer等等运运用体细用体细
胞杂交胞杂交并并结结合合杂杂种种细胞的细胞的特特征征，，证证明杂明杂种种
细胞的细胞的存存活活需需要要胸苷激酶胸苷激酶（（TKTK））。。凡凡是是含含
有人有人1717号染色号染色体体的杂的杂种种细胞细胞都都因有因有TKTK活性活性
而存而存活活，，反反之之则则死亡死亡，，从从而而推推断断TKTK基因定基因定
位于位于1717号染色号染色体体上，上，这这是首是首例例应应用体细胞用