小鼠骨髓的综合性实验报告.doc

小鼠骨髓的综合性实验报告
本科学生综合性实验报告
学号 姓名
学院 专业、班级
实验课程名称:
教师及职称
开课学期 至 学年 学期
填报时间 年 月 日
云南师范大学教务处编印
一( 实验设计方案
酸，临用时现配)，Giemsa染液，%柠檬酸钠，(PBS)。 4、生物显微镜、解剖剪、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、塑料吸瓶、吸水纸等。 四、 实验方法步骤及注意事
‎‎项
一、小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观‎‎察
1、 处理:‎‎处理小鼠()。
即用以上配制的秋水仙‎‎。注射后24小时，可以
取骨
2、 处死:断颈法处死小鼠。剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，
剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。去股骨的
髋面，%柠檬酸三钠溶液的小注射器的针头插入，反复几次吹出骨
髓细胞，反复吹打直至股骨呈白色，制成细胞悬液。
3、低渗:将细胞悬液在1000rpm/min离心5min，弃除上清液，。向细胞液中再加入1%的柠檬酸三钠溶液 5ml 用吸管轻吹打均匀，在室温低渗 30min。低渗期间，配制固定液，即甲醇:冰醋酸为3:1(v/v)，置4 ?冰箱中备用。
(1次):低渗处理后的细胞悬液‎‎离心5分钟，留1ml原液，摇匀。加入新配制的固定液至‎‎6ml，吹打均匀，固定5分钟，再在1000rpm/min离心3-5min，去掉上清液。
5、固定(2次):沿离心管壁慢慢加入新配制的固定‎‎液6ml，用吸管轻轻吹打均匀，室温下固定5min，1000rpm/min 3min，弃去上清;如此
反复固定两次(共固定3次)。
，~ ，用吸管打均匀，使其形成细胞悬液。
:将预冷的载玻片(0?冰浴)，水平或倾斜45? 角放置，用吸管吸取细胞悬液， -1m高处滴 1~2滴到片子上，用口将其吹干，静置使其干燥。
:将干燥的玻片放入2ml吉姆萨原液加入40ml磷酸缓冲液()配成的染液中染色20min，用磷酸缓冲液()冲洗，晾干后镜检。 二、微核试验方法:
1、骨髓的制取:断颈法处死小鼠。用剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。去
股骨的髋面，% Nacl生理等渗液小注射器的针头插入，反复几次吹出骨髓细胞。反复吹打使其混合均匀‎‎，制成细胞悬液。
将细胞悬液在1000转/分离心5分钟，弃除上清液。
2、涂片:在离心管中加入少量的‎‎小牛血清()混匀后，按血常规涂片法涂片，长度约2cm ~3cm (涂片时一次涂成)。在空气中晾干。
3、固定:将干燥的涂片放入甲醇液中固定5min。即使当日不染色，也应固定后保存。
4、染色:将固定过的涂片放入Giemsa应用液中，染色20min ~30min，。
5、封片:用滤纸及时擦干染片背面的水滴，再用双层滤纸轻轻按