超氧化物歧化酶SOD活性测定.ppt

超氧化物歧化酶SOD活性测定
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一、意义：
细胞内自由基的产生和消除处于动态平衡状态，自
超氧化物歧化酶SOD活性测定
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一、意义：
细胞内自由基的产生和消除处于动态平衡状态，自由基水平很低，不会伤害细胞。
植物正常情况下
植物逆境胁迫下
O-.2、H2O2、OH·的产量增加；SOD、CAT、POD活性降低；VtE、VtC、CAR、GSH含量降低；从而伤害细胞。
植物体内活性氧代谢系统的平衡被打破
什么叫逆境？
逆境是指对植物生存生长不利的各种环境因素的总称.
逆境的种类?
为什么要测定完全液和缺素苗的SOD活性？
二、目的要求：
；
；

玉米苗叶片SOD活性的差异。
三、原理：
三、原理：
依据SOD能抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2.-，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2.-，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。
四、仪器设备
研钵；玻璃试管; 40W荧光灯; 移液管等。
五、试剂配制
1、提取介质─50mmol/L()磷酸缓冲液。
2、反应介质─50mmol/L()磷酸缓冲液, , EDTA, 。
3、: EDTA的50mmol/L()的磷酸缓冲液配制。
SOD反应混合液


式中：Ack为2号对照管溶液在560nm处的吸光度值;
AE为样品测定管溶液在560nm处的吸光值;
V为酶液总体积（ml)；
W为提取酶液的植物材料的鲜重（g)；
Vt为测定时酶液的用量(ml)。
八、结果计算：
（Ack-AE)×V
SOD活性(U/g鲜重)＝───────────
Ack×W×Vt×50％
一个酶活单位定义为将硝基四唑蓝的还原抑制到对照一半(50％)时所需的酶量。
九、注意事项:
。包括厚度、直径、质量等。
。照光时试管放的高度、背景等。
。
4. 植物组织中的酚类物质对测定有干扰，对酚类含量高的材料提取酶液时可加入聚乙烯吡咯烷酮消除。
。
十、思考题:
。
？应如何克服？
：改良半叶法测定植物光合速率
2. 请按《植物生理生化实验B》补充材料认真书写预习报告！
3. 实验适宜时间：晴天上午8~9点开始。 具体时间要看气候，如果本周日晴天，就先测定光合速率，“叶绿体色素定量测定”可以调到下周上。请转告今晚请假的同学。

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