蛋白质的一级结构.ppt

肽链是有方向性的(directional)
肽链的一端有游离氨基，称氨基末端（或N末端 N-terminal），另一端有游离羧基，称羧基末端（或C末端 C-terminal)；
肽链写法：游离α-氨基在左，游离α-羧基在roup)
(conjugated protein)
辅基种类很广，常见的有色素化合物、寡糖、脂类、磷酸、金属离子甚至核酸
根据组成不同蛋白质可分为
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根据蛋白质形状可分为球状蛋白与纤维状蛋白：
纤维状蛋白质(fibrous protein)
球状蛋白质(globular protein)
肌动蛋白
毛发中的角蛋白
蚕丝丝心蛋白
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根据含多肽链数目可分为单体蛋白和多体蛋白
寡聚蛋白(oligomeric protein)
或多体蛋白(multimeric protein)
单体蛋白(monomeric protein)
异型多体蛋白(heteromultimeric protein)
同型多体蛋白(homomultimeric protein)
寡聚蛋白中的每一个具三级结构的多肽链称亚基(subunit)
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应用：由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去;
多数球状蛋白质溶于水形成胶体溶液
蛋白质溶胶性质：
：1～100nm



根据蛋白质的结构和性质特点可对蛋白质进行分离鉴定
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蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量大小、所带的电荷和水化作用有关。
破坏蛋白质胶体的稳定因素，将促使蛋白质沉淀析出
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蛋白质处于PI时，净电荷为零。溶解度最低
不同蛋白质↓
等电点不同
↓ 调节pH值
将蛋白质彼此分开
等电点沉淀和pH控制:
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随着盐浓度的升高，如饱和或半饱和时，蛋白质溶解度逐渐降低，相互聚集而从水溶液中沉淀析出，这种现象叫盐析。
解释：大量中性盐的加入，使水的活度降低，原来的溶液中的大部分自由水转变为盐离子的水化水。降低蛋白质极性基团与水分子间的相互作用，破坏蛋白质分子表面的水化层。
常用的中性盐：（NH4)2SO4
特点：保持蛋白质的天然构象——蛋白质分离、提纯常用方法。
加入大量中性盐可使蛋白质沉淀析出
低浓度时，中性盐可增加蛋白质的溶解度，即盐溶
原因：蛋白质分子吸附盐类离子后，带电层使蛋白质分子彼此排斥，且与水分子相互作用加强；
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有机溶剂分级分离法：
作用原理：①有机溶剂的加入改变了介质的介电常数，增加了两个相反电荷之间的吸引力，蛋白质的表面可离解基团的离子化程度减弱，水化程度降低，蛋白质分子聚集沉淀。
②有机溶剂与蛋白质争夺水化水，致使蛋白质聚集体形成并沉淀。
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离子交换层析
原理：样品中各蛋白质组分的净电荷、分子大小不同，与固定相间的作用力不同而被分离
洗脱方法：改变洗脱剂的盐浓度、PH值依次洗脱
结合力小的蛋白质先由层析柱中洗脱出来
分离效果与溶液中的离子强度、pH有关
常用固定相：
离子化纤维素――羧甲基纤维素（CM），二乙基氨基乙基(DEAE)纤维素优点：具有松散的亲水性网状结构，及较大的表面积，大分子可以自由通过交换容量大,洗脱条件温和,回收率高。
离子化葡聚糖――交联葡聚糖作基质
优点：交换容量比离子交换纤维素大3－4倍。
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Cation-
exchange
column
pH=，基质带负电荷
蛋白组分带不同电荷
逐渐提高洗脱液的pH值，各组分以此被洗脱下来
问：洗脱顺序？
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即分子排阻层析（也称凝胶过滤层析，分子筛层析）
凝胶过滤：
原理：凝胶颗粒内部为多孔的网状结构。当不同分子大小的蛋白质混合物流经凝胶层析柱时，比凝胶网孔大的分子不能进入珠内网状结构，而被排阻在凝胶珠之外。随着溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下移动并最先流出柱外；比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶珠的内外。不同分子大小路径不同洗脱：
大分子--先洗脱出来
小分子--后洗脱出来
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亲和层析
基础：基于蛋白质所具有的生物学特异性。（它与另一种称配基的分子能特异而非共价的结合）
蛋白质样品加入到连有配基的基质中（固定相）
↓
目标蛋白质与配体结合，吸附在琼质糖颗粒上
↙↘ 其它蛋白质先被洗脱下来