05标记Ph和蛋白量.doc

备注:此讨论为 NaCl 滴定法,其缺陷详见涛哥答疑录。问: 最佳 PH 值试验步骤: ①先取 5个 EP 管(进口) ,各取 1ml 粒径为 23nm 左右的最新制的胶体金,用 碳酸钾调 Ph 值,由精密试纸进行确定,最后发现以下关系: pH 值6789 10 加入碳酸钾量 0 7ul 12ul ②之后再重新取五个 EP 管,加 1ml 胶体金, 再按上面的关系加对应的体积的碳酸钾,调好相应的 Ph 值; ③再直接在里面取 200ul 胶体金加到另外五个 EP 管中,然后在每管中加 4ul 的浓度为 2mg/ml 的抗体; ④过十分钟后再加 40ul 10%NaCl , 再静待颜色的变化。结果很奇怪:从左到右的 PH 是 6789 10 。是金的问题、试剂的问题、抗体的问题、还是步骤的问题? T: 一般情况下是抗体的问题。再者: 200ul 胶体金加 4ul 的浓度为 2mg/ml 的抗体, 标记量高了。标记量要通过具体试验来确定。一般 5-20ug/ml , 跟方法学、实际需要和原料性质有关。 0 ug/ml ?还是 mg/ml 啊?像我这种只是做做实验而已的, 一般浓度多少?好像浓度不一样对结果影响很大吧? 我换别的不同金现结果变了, 应该是金的问题吧?图片在下面: T: 不同的胶体金颗粒和不同的质量, 对抗体的结合差别也是很明显的。我说的是实际标记量,每毫升胶体金结合 5-20ug 抗原/ 抗体, 而不是抗原/ 抗体的使用浓度。如果仅仅是做做实验, 可以每毫升胶体金标记 15ug 抗原/ 抗体。出现以上现象, 并不能简单的说是抗体有问题或者胶体金有问题, 可以通过性能实验来确定, 胶体金和抗体是否可用。 0 抗体是新买来的, 做出来的结果也是这样和之前的抗体一样, 换了胶体金之后就好了。也就是说不同的抗体结果一样都是有问题的, 一换胶体金之后结果就变了, 变得正常了。还有, 我最近用那个 ph=8 的结果来做最小蛋白量的测定, 结果 EP 管的颜色如下图: ①每管有 200ul 胶体金( ph=8)( 经精密试纸测得, 碳酸钠 加入 1000ul 胶体金中即可配到); ②然后抗体的浓度是 2mg/ml 。③我现将每管的蛋白质量算好如下: 0、 、 、 、 、 、 、 、 ( ul) 共九管。④体积则为质量浓度之比换算而得⑤加入抗体后再反应 5--10 分钟再加入 40ul 10% NaCl 得到的图像如下: T: 每个人操作方法可能有差异, 但是你的操作没有大的问题, 从最后一张图片上看试验结果也没有问题。你换了胶体金之后,结果出现异常的话,很可能跟胶体金的粒径或质量有关。 0 可能是照相的问题,