CHO细胞大规培养.doc

1 -- 摘要 CHO 细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary , CHO) , 195 7 年美国科罗拉多大学 Dr. Theodore T. Puck 从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得, 为上皮贴壁型细胞。微载体细胞培养开始于 19 世纪 60 年代末期, 最早使用离子交换凝胶( DEAE-Sephadex A50 )作为载体,轻微搅动即可悬浮在培养基中。由于这种微载体带有电荷,利于细胞贴附于载体上进行生长繁殖。载体处于悬浮状态时,这样既可大大增加细胞附着面积, 又使细胞能与培养基充分接触,进而有利于细胞的生长,因此能达到大量培养细胞的目的。后来根据细胞附着生长的特点, 对微载体进行改良, 使其电荷或其介质更利于细胞附着和生长。培养液中大量的微载体为细胞提供了极大的附着表面, 1g 微载体其比表面积可达 6000 cm2 ,从而可实现细胞的高密度培养。首先将 CHO 细胞在无血清培养基( SAF-CHO-G-004 ) 中进行无血清驯化。其次将 CHO 细胞( 成功用无血清驯化后的细胞)用 % 胰酶消化制成细胞悬液后, 沿导流管加入含明胶微载体和 SAF-CHO-G-00 4 细胞培养基的 WhcltonBioste r 瓶罐中连续培养生成一定量的种子细胞。最后将种子细胞进行大规模培养。运用半连续式培养来操作:在细胞增长和产物形成过程中,每间隔一段时间,从中取出部分培养物,再用新的培养液补足到原有体积,使反应器内的总体积不变。最后在细胞培养过程中进行细胞常数的检查和培养基内污染物的检测一些抗凋亡策略来增加细胞培养的效率。[ 关键字] CHO 细胞; 明胶微载体; 无血清培养; 半连续式培养 2 -- 目录摘要..................................................................................................................... 1 关键字: CHO 细胞明胶微载体无血清培养半连续式培养...................... 1 绪论..................................................................................................................... 3 细胞培养的特性................................................................................... 3 培养基的物理性质................................................................................. 5 无血清培养............................................................................................. 7 蛋白质作基质的微载体......................................................................... 9 微载体培养原理与操作....................................................................... 10 微载体培养种子细胞........................................................................... 13 微载体培养的细胞传代....................................................................... 13 半连续式培养( semi-continuous culture ) 操作.......................... 14 细胞常数检查........................................................................................... 16 细胞培养内污染物的检测................................................................. 16 真菌污染对细胞的影响及污染物的检测..............