培养基母液配制.doc

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质,配制成较浓的母液(母液浓度为培养基浓度的若干倍如 50或100 倍),贮存在冰箱中备用,以后配制培养基时根据用量量取。由于培养基成分较多,如果每配制一次即进行多次称量(不少成分用量较微),不仅会造成较大的误差,而且会增加工作量,因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的 20、50或100 倍,倍数不宜过高。 MS培养基母液及培养基配方法参考表 2。大量成分母液经常将 CaCl2 ·2H2O 单独配制保存,以免长期贮存发生沉淀。若将全部大量成分配在一起时,为防止在混合时发生沉淀,须在各药品充分溶解后,按表 中化合物出现顺序混合,氯化钙最后加入,以免与硫酸镁形成沉淀. 大量成分称量溶解后,在 1000 ml容量瓶中定容,然后移入磨口瓶中,贴上标签,置于普通冰箱( 4℃)贮存。微量元素母液配制时,由于培养基中微量元素用量甚微,浓度为 ~ ,所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的 100 倍。一般将微量元素分别称量溶解,定容在 1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中,但也有将 KI分别配制,单独贮存在棕色瓶中。配好后,贴上标签,贮存于 4℃冰箱。培养基中的铁盐母液一般单独配制。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。称取 Na2-EDTA g,FeSO4 ·2H2O g,分别溶解(可加热),然后混合定溶于 1000 ml容量瓶中。转入细口瓶,贴上标签, 4℃冰箱中保存。氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时,母液浓度通常为原培养基配方的 50倍(或100 )。常用氨基酸和维生素为水溶性物质,可用蒸馏水溶解,但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解,然后用重蒸馏水定容。配制好后,转入细口瓶, 贴上标签, -20 ℃(或 4℃)冰箱中保存。植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要,灵活设计其浓度,一般为 、 、 、 或1mg/l 。如配 mg/l NAA 母液,称25mg NAA 溶于 50ml重蒸馏水,或 50mg的NAA 定溶于 100 ml重蒸馏水中。 IAA 要用棕色瓶暗中贮存,以免光照分解。常用植物生长调节物质和维生素特征见表 3。生长素为醇溶性物质,配制时,应用少量 95% 酒精或稀碱溶解,然后用重蒸馏水溶解定容;细胞分裂素应先用少量 1NNaOH 或HCl 溶解,然后用重蒸馏水定容。配制好的母液放置在 4℃普通冰箱中备用。这些母液保存时间不宜过长,当出现沉淀、浑浊及霉菌团时,应重新配制。椰乳中因含有许多种细胞分裂素物质,如 KT类似物(9-β-D-ribofuranosylzeatin )、玉米素及玉米素核糖甙等,有时可与细胞分裂素相互代替。采集到椰子时,应检查其汁液(保证没有变质),煮沸,滤纸过滤掉蛋白,高温高压消毒,贮存在-20 ℃下备用。有时可直接加入培养基。酵母提取液也一般也现用现配,称量酵母粉后,加热至沸腾 30分钟,过滤去渣。四、实验步骤 1 、大量元素母液的配制各成分按照表 1 培养基浓度含量扩大 10 倍用天平称取,用蒸馏水分别溶解, 按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml 的容量瓶中,即为 10 倍的大量元素母液。到入细口瓶, 贴好标签保存于