石蜡切片-苏木精-伊红对染法.doc

石蜡切片制作( 苏木精- 伊红对染法) 实验原理: 石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法( 简称 . 对染法) 是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛, 对组织细胞的各种成分都可着色, 便于全面观察组织构造, 而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。经过 HE 染色,细胞核被苏木素染成蓝紫色, 细胞质被伊红染色呈粉红色。一、器材及试剂: 1. 器材: 切片刀, 切片机, 恒温箱, 蜡杯, 酒精灯, 解剖刀, 解剖剪, 解剖盘, 培养皿, 镊子, 单面刀片,毛笔,包埋盒,染色缸,盖玻片,载玻片,玻片盘,树胶,树胶瓶,显微镜,温度计,脸盆,水浴锅。切片机, 切片刀, 温台, 恒温箱, 解剖刀, 镊子, 剪刀, 解剖针, 单面刀片, 小台木, 洒精灯,包埋纸盒,染色缸,烧杯,水盆,熔蜡炉,蜡杯。 2. 试剂: 中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液, 1% 伊红酒精溶液, 1% 盐酸酒精溶液,甘油蛋白粘片剂,中性树胶。卡诺( Carnoy )固定液,埃利希苏木精染液, 1% 伊红酒精溶液, 1% 盐酸乙醇液,各级酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% ) ,二甲苯,甘油蛋白粘片剂,中性树胶。 3. 材料: 鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。二、实验原理: 石蜡切片是最基本的切片技术, 冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法( 简称 . 对染法) 是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛, 对组织细胞的各种成分都可着色, 便于全面观察组织构造, 而且适用于各种固定液固定的材料, 染色后不易褪色可长期保存。经过 HE 染色, 细胞核被苏木素染成蓝紫色, 细胞质被伊红染色呈粉红色。三、试剂配法: 1 .中性甲醛固定液: 甲醛( 37%-40% ,市售,本所购买即为此浓度) 100mL 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾(钠) 4g 双蒸水 900mL 2 .苏木精、伊红染色液为碧云天产品 3. 1% 盐酸乙醇液盐酸 1份 70% 酒精 100 份 4. 甘油蛋白贴片剂: 蛋白 50 ml 甘油 50 ml 水杨酸钠(防腐剂) 1g 配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中, 去蛋黄留下蛋白, 用玻棒调打成雪花状泡沫, 然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中, 经数小时或一夜, 即可滤出透明蛋白液。此时在其中再加等量的甘油, 稍稍振摇使两者混合。最后加入防腐剂( 水杨酸钠) 作防腐用。可保存几个月。四、实验步骤: 1. 取材颈椎脱臼法处死小鼠,打开腹腔,剪取肝组织(或其他组织)。切取的组织块不宜太大,以利于固定剂穿透, 通常以 5mm × 5mm × 2mm 或 10 mm × 10 mm ×2 mm 为宜。取下所需要的肝组织,切成一小块 2- 3mm 厚。注意事项: (1 )取材动作要迅速,不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。(2 )切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要损伤所需要的部分。 2. 固定将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下,立即投入中性福尔马林固定液中固定,固定 30 -