DC细胞的体外诱导培养方法与前体细胞的选择.docx

DC在机体免疫监视机制中起着哨兵作用，它能对肿瘤抗原进行识别、处理和提呈，从而启动机体对肿瘤的特异性免疫应答。目前制备的以DC为基础的肿瘤疫苗就是利用DC这一特性，因此有效地在体外扩增培养DC是制备DC肿瘤疫苗的重要前提。以下我们将就DC前DC在机体免疫监视机制中起着哨兵作用，它能对肿瘤抗原进行识别、处理和提呈，从而启动机体对肿瘤的特异性免疫应答。目前制备的以DC为基础的肿瘤疫苗就是利用DC这一特性，因此有效地在体外扩增培养DC是制备DC肿瘤疫苗的重要前提。以下我们将就DC前体细胞选择以及DC培养所需细胞因子进行介绍。
一、DC前体细胞的选择
1•直接分离骨髓、脐带血或外周血中DC：
DC在组织中含量甚微，%〜%，难以分离、纯化，且呈高度分化状，体外不易长期培养，更难建系。因此该分离方法目前仅用于3C免疫活性，表面标志及DC亚型功能差异的研究；
2•从人骨髓或脐带血的CD34+造血干细胞诱导DC：
我们通常所指的DC均为髓系DC，其来源于人CD34+造血干细胞。CD34+造血干细胞是具有多向分化潜能和大量增生能力的细胞，其可从人骨髓或脐带血中分离，在体外通过联合GM—CSF、SCF、IL—6、IL—3等多种细胞因子培养，诱导扩增生成大量的DC，但其缺点在于取材不方便，不利于广泛使用；
3•分离外周血中CDI4+单核细胞：
此方法为目前最常选用的分离获取DC前体细胞的途径。通过淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，利用免疫磁珠分选出CDI4+单核细胞，采用GM—CSF与IL—4（或IL—13,其与IL—4具有相似性质）联合培养体系，经7〜10天即可诱导出大量的典型的DC；
4•由高度纯化的中性粒细胞前体细胞诱导DC：
利用高度纯化乳铁蛋白阳性的中性粒细胞前体细胞，在培养体系中加入6MCSF，IL—4和TNF—d，可得到DC样形态及具有DC相关表面分子的细胞。从功能上比较，这些中性
粒细胞诱生的DC特征与经典DC的群体相似;
5■从人外周血或脐血CD34+前体细胞诱导DC：
由于CD34+造血干细胞含量非常少，因此应用受到限制。为克服这一难点，有人即采取分离外周血或脐血中含量较高的CD34+前体细胞联合细胞因子大量培养扩增，诱导生成DC；
6■由白血病细胞诱导分化生成DC：
目前的研究发现，可将白血病细胞诱导分化为功能成熟的DC,且这些白血病细胞来源的DC可提供大量的白血病相关抗原并进行肿瘤抗原呈递，而无需体外预激过程，从而减少了污染的机会，这种体外扩增的方法在临床治疗应用上极具吸引力。
二、DC体外培养所需细胞因子
1•经典细胞因子组合最经典的体外扩增培养的细胞因子组合为：
粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)、白介素4(IL—4)。GM-CSF可以促进髓系细胞发育，是维持、诱导DC发育和分化的最根本的细胞因子；IL—4可以抑制粒细胞和巨噬细胞生长，从而使CD34+前体细胞或CDI4+单核细胞向DC方向发展。该细胞因子组合培养的DC，纯度高达95%以上，但诱导生成的DC多为不成熟的DC。
只有在加入一些刺激物口：1)细菌菌体或其产物：LPS、SPA等；2)某些炎症介质作用的细胞因子：TNF—a、PGE2、IL—p、IFN—p、IFN—Y等；3)某些刺激信号如CD40配