微生物检验 4 鸡胚接种培养.doc

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鸡胚接种培养
【实验目的】 掌握鸡胚的孵化和观察方法，掌握尿囊腔病毒接种与收获方法。
【实验原理】 尿囊腔接种广泛用于流感病毒、新城疫鸡瘟病毒的适应和传代培养，这些病毒被注射到尿囊腔后，可在内皮细胞中复制，复制的病毒被释放到尿
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鸡胚接种培养
【实验目的】 掌握鸡胚的孵化和观察方法，掌握尿囊腔病毒接种与收获方法。
【实验原理】 尿囊腔接种广泛用于流感病毒、新城疫鸡瘟病毒的适应和传代培养，这些病毒被注射到尿囊腔后，可在内皮细胞中复制，复制的病毒被释放到尿囊腔中，因此，在尿囊液中含有大量的病毒。
【实验器材】 孵化设备、检卵器、钻孔器、孵卵架或卵托、超净工作台、酒精灯、碘酒或酒精棉球、注射器、无菌胶布、镊子、无菌眼科镊子、无菌眼科剪刀、无菌容器、平皿、无菌吸管、吸头。
【实验方法】
鸡胚的孵化：将受精卵气室向上放于蛋托上，℃±1℃培养，相对湿度 45%～60%的孵化箱中孵化，从第3天开始，每隔4～6h翻蛋1次。 鸡胚孵化9～11日，检卵灯下观察。
鸡胚尿囊腔接种：新城疫鸡瘟病毒疫苗株
（1）选择发育良好的9～11日龄鸡胚。
（2）接种前用检卵器观察并标记出胚胎的气室及胚胎位置，在气室边缘上2～3mm胚胎附近没有大血管区域标出尿囊腔接种部位。
（3）把鸡胚气室向上放置于蛋托上，对接种部位的蛋壳表面用碘酊和酒精棉消毒。
（4）用钻孔器在气室接种部位打孔。用1ml注射器吸取病毒接种液 ～，经气室由小孔刺入5～10mm至尿囊腔部位，注入接种液。
（5）医用胶布过火焰，封闭卵壳上的孔，气室朝上置于35℃下孵育。
（6）对已接种的鸡胚每天在检卵灯下检查胚卵，将24h内死亡的鸡