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细胞生物学实验报告
细胞冻存
姓名：
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同组成员：
一、实验原理
在低于 -70 ℃的超低温条件下，由机体内部的生化反应极其缓慢，甚至终止，因此采用
适当的方法将生物材料降至超低温条件， 即可使生命活细胞生物学实验报告
细胞冻存
姓名：
学号：
班级：
专业：
同组成员：
一、实验原理
在低于 -70 ℃的超低温条件下，由机体内部的生化反应极其缓慢，甚至终止，因此采用
适当的方法将生物材料降至超低温条件， 即可使生命活动固定在某一阶段而不衰老死亡。 当
以适当的方法将冻存的生物体恢复至常温时，其内部的生化反应可恢复正常。
冷冻保存就是将体外培养物悬浮在加有或不加冷冻保存液的溶液中， 以一定的冷冻速率
降至零下某一温度，并在此温度下对其进行长期保存的过程。水在低于零度的条件下-结
冰f细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内
水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
目前常用的保护剂为二甲亚砜（ DMSO ）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解
度大， 易穿透细胞。 最适冷冻速度： 不同细胞的最适冷冻速度不同。标准冷冻的开始速度为
－ 1 至－2℃ /min ， 当温度低于－25℃时，可加速， 到－80℃时可直接加入液氮中 （－196℃）。
复苏细胞时则直接将细胞的冻存管放到40 ℃热水中迅速解冻。
二、实验目的
1、掌握无菌操作技术。
2、 .掌握细胞冻存的一般方法与步骤。
3、掌握培养细胞的消化方法。
4、了解在倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况。
三、实验仪器、材料、试剂及用品
1、仪器：超净工作台、CO2 培养箱、倒置相差显微镜
2、材料：人宫颈癌HeLa 细胞
3、试剂：胰酶、DMEM 培养基、血清、 DMSO 、抗生素
4、用品：培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75 ％酒精棉球，酒精灯
四、实验步骤
1、穿好实验服，进入无菌室前穿鞋套、洗手。
2、倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用
液置 370C 下预热。
3 、无菌室及超净台紫外线照射，关闭超净台紫外灯 , 打开可见光灯开关，打开抽风机，用
75%酒精擦双手消